基因芯片用于鼠疫耶爾森菌檢測(cè)的研究.pdf

1、鼠疫是由鼠疫耶爾森菌所致的烈性傳染病,曾在人類(lèi)歷史上三次大流行,并造成約2億人死亡,全世界為之戰(zhàn)栗.過(guò)去幾十年鼠疫在全球范圍內(nèi)的流行都已經(jīng)得到有效的控制,但近年陸續(xù)又有一些自然疫源地復(fù)燃和新自然疫源地出現(xiàn),以及可能被生物恐怖分子用作武器,使其仍然是公眾健康安全的隱患.因而我們需用分子生物學(xué)手段對(duì)該疾病重新認(rèn)識(shí),并在快速診斷和疫苗研制上取得了新的突破,才能從根本上遏制住它的再次大流行,現(xiàn)在利用基因芯片技術(shù)對(duì)鼠疫菌做進(jìn)一步的研究仍具有現(xiàn)實(shí)意

2、義.基因芯片技術(shù)是上世紀(jì)90年代興起,源于計(jì)算機(jī)集成化芯片理念的一門(mén)新技術(shù).實(shí)質(zhì)就是利用Southern blot原理,以可尋址的方式在載體表面,有序地點(diǎn)陣排列大量DNA雙鏈或Oligo探針.這些被固定在基質(zhì)的探針上就形成了高密度DNA微陣列.樣品DNA或RNA經(jīng)過(guò)熒光標(biāo)記,與陣列上的探針進(jìn)行雜交反應(yīng),按照堿基互補(bǔ)配對(duì)原則,探針特異性地結(jié)合相應(yīng)被熒光標(biāo)記的分子.用激光激發(fā)熒光標(biāo)記物,就可獲得樣品分子的信息,從而對(duì)基因序列及功能進(jìn)行大規(guī)模

3、、高通量、平行地研究.鼠疫耶爾森菌含有3個(gè)公認(rèn)與致病性有關(guān)的質(zhì)粒,分別是9.5kb、70kb和ll0kb,已知的序列提示它們的開(kāi)放閱讀框編碼密度很高在70％以上,并且集中了多數(shù)已知的鼠疫致病性基因,我們直接利用其限制性片段,采用我們建立的巢式PCR方法進(jìn)行擴(kuò)增,制備出供芯片打印的探針,并結(jié)合馬文麗、鄭文嶺等建立的限制性顯示(Restriction Display,簡(jiǎn)稱(chēng)為RD)技術(shù)標(biāo)記樣品用于鼠疫的檢測(cè).基因芯片技術(shù)用于鼠疫耶爾森菌研究,