負載二苯甲酮芐醚樹枝軸向取代酞菁硅聚合物納米粒子介導(dǎo)的PDT對人RPE細胞的影響研究.pdf

1、目的：觀察酞菁硅聚合物納米粒子對體外培養(yǎng)人視網(wǎng)膜色素上皮細胞（hRPEs）增殖和抑制的影響，探討酞菁硅聚合物納米粒子介導(dǎo)的光動力學(xué)治療引起hRPEs損傷可能的機制。
　　方法：體外培養(yǎng)hRPEs并進行免疫組化鑒定，紫外可見分光光度計觀察hRP Es對酞菁硅聚合物納米粒子的攝取及代謝規(guī)律，CCK-8檢測PDT對hRP Es增殖和抑制的影響，熒光顯微鏡觀察Hoechst染色后細胞凋亡情況，激光共聚焦顯微鏡觀察PDT前后hRPEs線粒體

2、膜電位水平的變化，熒光顯微鏡、流式細胞儀檢測PDT前后hRPEs活性氧水平的變化。
　　結(jié)果：體外培養(yǎng)hRPEs，細胞4-6h可貼壁，呈長梭形，一般2-3d可貼滿瓶底。hRP Es進行角蛋白(CK8&18)鑒定,胞質(zhì)角蛋白(CK8&18)染色陽性。紫外可見分光光度計觀察hRP Es對酞菁硅聚合物納米粒子的攝取率隨時間延長而增高，在4h達到高峰，之后隨著時間的推移攝取率降低。CCK-8檢測2.5umol/L、5umol/L、10um

3、ol/L酞菁硅聚合物納米粒子與細胞共培養(yǎng),不同濃度酞菁硅聚合物納米粒子對hRPEs產(chǎn)生的抑制作用不一，激光能量為1J時抑制率分別為13.70％、25.81%、15.28%，激光能力為2J時抑制率分別為15.49%、34.46%、24.76%，以5umol/L的濃度對hRPEs的抑制作用最大，所以能量不同對hRPEs的損傷作用也不同，能量越大，損傷作用越強，空白對照組與光敏劑組、激光組相比無統(tǒng)計學(xué)意義，而與PDT（1J）、PDT（2J）均

4、有統(tǒng)計學(xué)意義。Hoechst染色鑒定hRPEs在PDT前后的變化，結(jié)果顯示PDT前hRPEs核對Hoechst染色陽性且無異常變化，PDT后可見細胞核皺縮，還有凋亡小體的出現(xiàn)，核染色亮度明顯增高，提示細胞經(jīng)歷凋亡過程。激光共聚焦顯微鏡觀察PDT前后膜電位水平，證實PDT后線粒體膜電位下降，PDT組線粒體膜電位下降水平與激光組、光敏劑組和對照組相比差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。熒光顯微鏡檢測PDT組、激光組、光敏劑組和空白對照組活性氧水平熒光染色，