版權(quán)說(shuō)明:本文檔由用戶(hù)提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請(qǐng)進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡(jiǎn)介
1、精子的成熟過(guò)程受細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)磷酸化的調(diào)控,而蛋白質(zhì)磷酸化受蛋白激酶(英文全稱(chēng),PK)和蛋白磷酸酶(英文全稱(chēng),PP)的雙重調(diào)控。有關(guān)蛋白激酶活性調(diào)控對(duì)小鼠精子成熟的影響已有許多研究報(bào)道,但是蛋白磷酸酶活性及其調(diào)控對(duì)小鼠精子成熟的研究尚未多見(jiàn)。本研究的目的旨在證明小鼠精子中蛋白磷酸酶的存在及其活性的調(diào)控對(duì)小鼠精子的影響。采用6~8周齡昆明雄性小鼠為試驗(yàn)材料,用PNPP試劑盒及分光光度法,進(jìn)行了如下研究。 1.睪丸提取液及精液的容積對(duì)
2、蛋白磷酸酶活性的影響。將睪丸(140±10mg/mL)和精子(5~7×10<'6>個(gè)/mL)用超聲破碎儀破碎,提取上清液,分別抽取不同容積的提取液,用于蛋白磷酸酶活性分析。結(jié)果顯示,小鼠睪丸中存在較高的蛋白磷酸酶活性,隨著提取液容積的增加,蛋白磷酸酶的活性顯著(P<0.01)升高。小鼠附睪精子中蛋白磷酸酶的活性較低,但隨著精子提取液量的增加,蛋白磷酸酶活性顯著(P<0.01)升高。根據(jù)提取液容積依賴(lài)性的酶活性曲線圖,將用于酶活性反應(yīng)的睪
3、丸提取液的量為5ul,精子提取液的量為為20ul。 2.睪丸組織提取液與底物的反應(yīng)時(shí)間對(duì)蛋白磷酸酶活性的影響。將睪丸提取液與底物反應(yīng)的時(shí)間設(shè)定為0min、10min、15min、30min、1h、1.5h、2h、2.5h、3h,觀察反應(yīng)時(shí)間依賴(lài)性的酶活性曲線。結(jié)果顯示,在與底物反應(yīng)半小時(shí)開(kāi)始,酶活性曲線直線上升,反應(yīng)兩小時(shí)候以后酶活性曲線基本達(dá)到平衡。因此,酶與底物作用時(shí)間區(qū)域在0.5~2.0 h之內(nèi)。對(duì)于酶活性較高的提取物可設(shè)
4、反應(yīng)時(shí)間為30分鐘,酶活性較低的提取物可增加反應(yīng)時(shí)間至1.0 h。 3.睪丸和附睪組織中蛋白磷酸酶活性的比較。采用相同重量(140±10mg/mL)的睪丸、附睪頭部和附睪尾部的提取液進(jìn)行酶活性測(cè)定。結(jié)果顯示,睪丸組織蛋白磷酸酶活性最高,其次是附睪頭部,附睪尾部最低,三者之間差異極顯著(P<0.01)。 4.睪丸和附睪精子蛋白磷酸酶活性檢測(cè)。睪丸精子用Percoll梯度濃度分離法分離,附睪精子用浮游方法分離。分離后分別調(diào)節(jié)
5、濃度,經(jīng)破碎分離上清液,測(cè)定蛋白磷酸酶活性。結(jié)果顯示,睪丸精子蛋白磷酸酶活性最高,其次是附睪頭部精子,附睪尾部精子最低,三者之間差異顯著(P<0.01)。 5.睪丸精子蛋白磷酸酶1和蛋白磷酸酶2A活性檢測(cè)?;ㄝ嗪>d誘癌素A(calyculin A,CA)和岡田酸(Okadaic acid,OA)是蛋白磷酸酶1(protein phosphatase 1,PP1)和蛋白磷酸酶2A(protein phosphatase 2A,PP
6、2A)的特異性抑制劑,PP1和PP2A對(duì)CA同樣敏感,而PP2A對(duì)OA的敏感性比PP1高100倍,因此根據(jù)不同濃度CA和OA對(duì)精子提取液的抑制能力,可以檢測(cè)精子提取液中PP1或PP2A的含量。分離睪丸精子,經(jīng)破碎添加CA和OA,檢測(cè)蛋白磷酸酶活性。結(jié)果顯示,當(dāng)CA的濃度增加至1.0 nmol/mL時(shí),能夠強(qiáng)烈抑制(84%)蛋白磷酸酶活性,繼續(xù)增加CA的濃度并沒(méi)有顯著提高抑制效果;當(dāng)OA的濃度增加1.0 nmol/mL,時(shí)幾乎不抑制蛋白磷
7、酸酶活性,繼續(xù)增加OA的量,能夠逐漸可抑制蛋白磷酸酶活性,當(dāng)OA濃度達(dá)到1000nmol/mL時(shí),能夠強(qiáng)烈抑制蛋白磷酸酶活性(88%)。 6.附睪精子蛋白磷酸酶1和蛋白磷酸酶2A活性檢測(cè)。分離附睪頭部和尾部精子,分別添加1.0 nmol/mL CA和OA,檢測(cè)蛋白磷酸酶活性結(jié)果顯示,與未添加對(duì)照組比較,無(wú)論是附睪頭部還是尾部精于,CA添加組都能夠顯著(P<0.01)抑制蛋白磷酸酶活性(80%),可是OA添加組僅有微弱的抑制效果。
8、 7.CA和OA對(duì)小鼠附睪精子運(yùn)動(dòng)能力的調(diào)控。采用浮游法分離附睪頭部和尾部精子,調(diào)節(jié)濃度為5~7×10<'6>個(gè)/mL,添加1.0 nmol/mLCA或1000 nmol/mL OA,在CO<,2>培養(yǎng)箱中孵育10分鐘(37℃,5%CO2),顯微鏡下觀測(cè)精子運(yùn)動(dòng)能力。結(jié)果顯示,無(wú)論是CA還是OA都能顯著(P<0.01)提高附睪頭部和尾部精子的運(yùn)動(dòng)能力。 上述研究結(jié)果表明,小鼠睪丸和附睪精子中存在明顯的蛋白磷酸酶活性。特異
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無(wú)特殊說(shuō)明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請(qǐng)下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請(qǐng)聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶(hù)所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁(yè)內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒(méi)有圖紙預(yù)覽就沒(méi)有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫(kù)僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對(duì)用戶(hù)上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對(duì)用戶(hù)上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請(qǐng)與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶(hù)因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 抑制蛋白磷酸酶1活性重啟成年小鼠眼優(yōu)勢(shì)可塑性的研究.pdf
- 蛋白磷酸酶活性測(cè)定及其凝膠電泳檢測(cè)方法的改進(jìn).pdf
- 19772.磷酸化調(diào)控的半合成熒光蛋白用于蛋白激酶和蛋白磷酸酶活性檢測(cè)
- 酪氨酸蛋白磷酸酶氧化還原調(diào)控的分子機(jī)理.pdf
- 蛋白磷酸酶PPM1A調(diào)控胞質(zhì)RNA檢測(cè)通路的功能與機(jī)制研究.pdf
- 低氧預(yù)適應(yīng)小鼠海馬中DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶、Reelin和蛋白磷酸酶-1的表達(dá).pdf
- 57518.人、大鼠和小鼠蛋白磷酸酶1抑制劑ppp1r14a基因的克隆
- 中華鱉肝臟蛋白磷酸酶的提取純化及其酶學(xué)特性研究.pdf
- 蛋白磷酸酶-1cγ在魚(yú)類(lèi)胚胎發(fā)育中的功能研究.pdf
- 酪氨酸蛋白磷酸酶調(diào)節(jié)蠶豆氣孔運(yùn)動(dòng)的證據(jù)及其機(jī)制.pdf
- 參與ABA積累調(diào)控的酪氨酸蛋白磷酸酶的分離及分子克隆.pdf
- 心肌缺血-再灌注損傷中蛋白磷酸酶PHLPP1的表達(dá)調(diào)控及作用機(jī)制研究.pdf
- 基于活性的絲-蘇氨酸蛋白磷酸酶探針的設(shè)計(jì)與合成.pdf
- 金屬依賴(lài)型蛋白磷酸酶1A對(duì)ERK的去磷酸機(jī)制研究.pdf
- 蛋白磷酸酶-1cβ在金魚(yú)胚胎發(fā)育中的功能研究.pdf
- 蛋白磷酸酶PPM1A對(duì)KAP1和SIRT1的調(diào)節(jié)作用.pdf
- 蛋白磷酸酶同工酶鑒定新方法的研究.pdf
- 擬南芥蛋白磷酸酶PP4耐鹽功能研究.pdf
- 蛋白磷酸酶PP1ca在金魚(yú)胚胎發(fā)育中的功能研究.pdf
- 蛋白磷酸酶5(PP5)對(duì)小鼠脂肪代謝及骨發(fā)育的影響.pdf
評(píng)論
0/150
提交評(píng)論