宮頸癌相關基因DNA甲基化與遺傳分析及臨床應用研究.pdf

1、宮頸癌是常見的婦科惡性腫瘤之一，發(fā)病率在乳腺癌之后，居第二位。全世界每年約有50萬左右的宮頸癌新發(fā)病例，占所有癌癥新發(fā)病例的5％。在我國隨著醫(yī)療衛(wèi)生事業(yè)的發(fā)展，宮頸癌死亡率得到了控制，但發(fā)生率一直居高不下，且有發(fā)病年輕化的趨勢，因此對宮頸癌發(fā)生機理及新的診療方法的研究一直是腫瘤學家研究的熱點。 宮頸癌的發(fā)生與人們行為因素具有一定關系，但在不同種族、不同地區(qū)發(fā)病特點不同。本研究通過對151例宮頸癌患者的病歷資料進行系統(tǒng)完整分析，發(fā)

2、現(xiàn)在我國宮頸癌多發(fā)于中老年婦女，但年輕患者發(fā)病率也很高，占12.58％，且年輕患者中94.74％達到中晚期，說明年輕患者發(fā)病后進展迅速，惡性程度高，所以對宮頸癌的篩查干預應提前到35歲以前。同時本文還對宮頸癌患者發(fā)病規(guī)律進行了分析，結果表明與對照組相比初次性交年齡早、性伴侶多、吸煙、酗酒等都是宮頸癌發(fā)生的危險因素，此外有上皮性腫瘤家族史和毒物接觸史的人患宮頸癌的幾率明顯加大，因此對這些高危人群定時體檢、篩查是預防宮頸癌的重要措施。

3、 宮頸癌的發(fā)生是遺傳因素與環(huán)境因素共同作用的結果，其中HPV病毒感染與宮頸癌發(fā)生密切相關。為了了解我國宮頸癌病人的HPV感染特點，本研究采用敏感性高、特異性強的實時熒光定量PCR技術，檢測了151例宮頸癌患者的HPV感染情況，發(fā)現(xiàn)HPV定量檢測均達到陽性檢測標準，感染陽性率高達100％；與國內(nèi)外其它研究小組報道不同，都是高危型：HPV混合感染，且以HPV18為主要感染類型的最多，達到39.74％，同時發(fā)現(xiàn)以HPV 33感染為主的病例也

4、達到24.50％，高于文獻報道的3％左右，以HPV 33為主要感染類型的患者臨床分期和組織學分級都高，說明：HPV 33感染與宮頸癌惡性度有關，HPV 33感染增多可能是我國宮頸癌HPV感染的新特點。 抑癌基因失活在細胞癌變中發(fā)揮重要作用。FHIT基因是一種抑癌基因，位于3p14.2，被認為具有HPV病毒的整合位點。FHTT基因與宮頸癌的關系以及作用機制目前尚無定論。本研究利用生物信息學方法獲得FHIT基因外顯子5～10及附近內(nèi)

5、含子序列，并依此設計引物，采用降式PCR檢測外顯子5～10的缺失情況，發(fā)現(xiàn)患者血漿中外顯子5缺失發(fā)生率為22.52％(34/151)，外顯子6缺失發(fā)生率為19.87％(30/151)，外顯子7缺失發(fā)生率為13.25％(20/151)，外顯子8缺失發(fā)生率為14.57％(22/151)，外顯子9缺失發(fā)生率為11.26％(17/151)，外顯子10缺失發(fā)生率為6.62％(10/151)，與對應宮頸癌組織中檢測出來的結果一致。將FHIT基因外顯

6、子缺失情況與FHIT蛋白表達情況對應起來發(fā)現(xiàn)FHIT基因外顯子5、6缺失與FHTT蛋白表達減弱或缺失具有重要關系，只有1例外顯子7缺失病例出現(xiàn)FHIT蛋白表達減弱。本研究雖然外顯子8～10缺失的病例沒有發(fā)現(xiàn)對應的FHIT蛋白表達改變，但只有宮頸癌患者發(fā)現(xiàn)有它們的缺失，所以外顯子8～10缺失與宮頸癌也具有一定相關性，但具體作用機制還有待于進一步研究?？傊?，F(xiàn)HIT基因外顯子缺失是FHIT基因失活，以至宮頸癌發(fā)生的重要遺傳機制。抑癌基因失活

7、既可以通過遺傳學途徑，也可以通過基因甲基化等表觀遺傳學途徑。國外有關于宮頸癌患者FHIT基因啟動子區(qū)甲基化情況的報道，但檢出率較低為32％左右，所以不能廣泛應用于臨床。本研究針對國內(nèi)外研究方法的缺點，利用生物信息學方法，設計了甲基化特異性引物，并對亞硫酸氫鈉修飾后的DNA濃度進行定量，提高了MSP的診斷正確率。通過對FHIT基因5'端啟動子區(qū)CpG島甲基化狀況分析，發(fā)現(xiàn)宮頸癌患者組織中存在FHIT基因高甲基化的現(xiàn)象，檢出率高達53.33

8、％，這為以甲基化為指標診斷宮頸癌提供了重要的實驗依據(jù)。 關于FHIT基因甲基化在宮頸癌發(fā)生中是早期事件，還是晚期事件，目前在國際上還存在著爭議。本研究發(fā)現(xiàn)在臨床Ⅰ期和G1級的患者中都有FHIT基因甲基化出現(xiàn)，隨著臨床分期與組織學分級的增加，F(xiàn)HIT基因甲基化發(fā)生的陽性率也在逐漸增加，并與FHIT蛋白表達的減弱或缺失有關，說明FHIT基因啟動子區(qū)甲基化在宮頸癌的發(fā)生中屬于早期事件，支持了Wistuba和Butler等人的觀點。同時

9、說明FHIT基因啟動子區(qū)的高甲基化狀態(tài)是引起宮頸癌發(fā)生的表觀遺傳學因素，它與FHIT基因外顯子缺失引起宮頸癌是兩種獨立的機制，但兩者有可能協(xié)同起作用。 CDHl基因編碼產(chǎn)物E-鈣黏素(E-CAD)是重要的細胞與細胞間黏附分子，CDH1基因失活被認為與腫瘤的浸潤和轉(zhuǎn)移密切相關，可以作為檢測腫瘤侵襲能力的指標。本研究檢測了宮頸癌患者CDH1基因啟動子區(qū)甲基化狀態(tài)，并與臨床分期和組織學分級對應起來，發(fā)現(xiàn)隨臨床分期與組織學分級的增加，C

10、DH1甲基化的檢出率也逐漸增加，CDH1基因甲基化狀態(tài)可以成為評估宮頸癌進展、治療效果以及預后的指標。腫瘤細胞可以釋放DNA進入患者的血漿/血清中，檢測患者血漿/血清中腫瘤DNA的狀態(tài)可作為無創(chuàng)傷性檢測腫瘤的指標。目前對于宮頸癌患者血漿中FHIT基因甲基化狀態(tài)尚無報道。本研究在國際上首次采用MSP的方法分別對血漿和組織中FHIT基因和CDH1基因的5’端啟動子區(qū)CpG島的甲基化狀況進行比較分析，發(fā)現(xiàn)血漿與組織的符合率在FHIT基因為80