三氧化二砷協(xié)同柔紅霉素對(duì)K562-A02細(xì)胞株作用的初步研究.pdf

1、目的：本課題旨在研究三氧化二砷(Arsenic Trioxid，As2O3)與柔紅霉素(Daunomycin，DNR)單獨(dú)及聯(lián)合應(yīng)用后對(duì)K562及其耐藥細(xì)胞株K562/A02的作用，以探討兩藥呈協(xié)同時(shí)可能存在的機(jī)制，為臨床治療耐藥及復(fù)發(fā)白血病提供理論基礎(chǔ)。
　　 方法：1、采用甲基四唑藍(lán)法(MTT)測(cè)定單用DNR、As2O3及兩藥合用48hr后對(duì)K562細(xì)胞和K562/A02細(xì)胞的增殖抑制作用，計(jì)算出IC50、耐藥逆轉(zhuǎn)倍數(shù)及藥物

2、協(xié)同情況。2、流式細(xì)胞儀檢測(cè)兩藥合用48hr后胞內(nèi)DNR相對(duì)濃度、凋亡率及膜上P-gp蛋白表達(dá)，采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(reverse transcription polymerasechain reaction，RT-PCR)測(cè)定細(xì)胞bc1-2基因及bax基因mRNA表達(dá)水平，采用蛋白印跡(Western-blot)法檢測(cè)bc1-2、bax、caspase-3及P-gp表達(dá)。3、用流式細(xì)胞儀檢測(cè)單用及兩藥合用48hr后細(xì)胞表面分化抗原

3、CD14、CD11b、CD71、CD61、CD34、CD117、CD33的表達(dá)情況。
　　 結(jié)果：1、DNR對(duì)K562及K562/A02細(xì)胞的IC50分別為0.4mg/L及15.4mg/L，與0.25、0.5、1.0μmol/LAs2O3合用后DNR對(duì)K562/A02的IC50分別為1.73、0.78、1.42 mg/L，耐藥逆轉(zhuǎn)倍數(shù)為8.9，19.7，10.8。2、1mg/LDNR作用于K562/A0248hr后的凋亡率為13

4、.5±5.6％，0.5μmol/LAs2O3作用后的凋亡率為46.7±6.4％，而兩藥合用后凋亡率為62.8±4.8％，呈協(xié)同作用。3、兩藥合用后K562/A02胞內(nèi)DNR相對(duì)濃度較單用DNR相比減少。4、兩藥合用48hr后K562/A02細(xì)胞bax基因的mRNA表達(dá)較對(duì)照組明顯上升，bc1-2基因表達(dá)明顯下降，差異具顯著性。5、兩藥合用48hr后K562/A02細(xì)胞bax及caspase-3蛋白表達(dá)同K562/A02空白對(duì)照組相比明顯

5、上升而bc1-2蛋白表達(dá)明顯下降，P-gp表達(dá)同K562/A02空白對(duì)照組相比無(wú)顯著性差異。6、K562/A02細(xì)胞經(jīng)兩藥聯(lián)合誘導(dǎo)48hr后，CD14基本無(wú)變化，CD11b、CD61、CD34、CD33、CD117表達(dá)明顯上升，而CD71表達(dá)明顯下降。
　　 結(jié)論：1、低濃度的As2O3與DNR聯(lián)合作用后對(duì)K562/A02細(xì)胞的作用為協(xié)同作用。2、兩藥合用后的協(xié)同作用與增強(qiáng)藥物的誘導(dǎo)凋亡作用有關(guān)。3、兩藥合用后對(duì)K562及K56