菟絲子黃酮、雷公藤多苷對原代培養(yǎng)幼鼠生精細胞增殖及凋亡影響的實驗研究.pdf

1、目的:通過觀察含 GTW、菟絲子黃酮藥物血清對體外培養(yǎng)的原代大鼠睪丸生精細胞增殖、細胞周期及凋亡的影響，探討菟絲子黃酮干預(yù)GTW所致生殖損傷的作用機制。本課題為國家自然科學(xué)基金項目的一部分內(nèi)容。
　　方法:體外培養(yǎng)大鼠睪丸生精細胞，將其分為空白組、9mgGTW組（多苷1號組）、9mgGTW+菟絲子黃酮組（黃酮1號組）、12mgGTW組（多苷2號組）、12mgGTW+菟絲子黃酮組（黃酮2號組），加不同含藥血清，于培養(yǎng)24h、48h后

2、，通過MTT法檢測含藥血清對生精細胞增殖的影響；采用流式細胞儀檢測含藥血清對生精細胞細胞周期及凋亡的影響。
　　結(jié)果:
　　1.生精細胞體外培養(yǎng)情況:生精細胞附著于支持細胞表面共同生長、分化持續(xù)3周；堿性磷酸酶顯色中，精原細胞表面或內(nèi)部可見藍紫色的NBT-formazan沉淀，其他細胞中未見；Feulgen染色中，生精細胞呈圓形或橢圓形，胞核大，占據(jù)整個細胞體積的90％。
　　2.含藥血清對幼年大鼠睪丸生精細胞增殖的影

3、響
　　2.1作用24h各含藥血清組相比較
　?。?）多苷1號組及多苷2號組OD值明顯低于空白組，統(tǒng)計學(xué)分析具有顯著差異；
　?。?）多苷1號組OD值稍低于多苷2號組，但無明顯統(tǒng)計學(xué)差異；
　　（3）黃酮1號組 OD值明顯高于多苷1號組，統(tǒng)計學(xué)分析有顯著差異；黃酮2號組OD值高于多苷2號組，具有統(tǒng)計學(xué)差異。提示菟絲子黃酮可拮抗GTW對生精細胞增殖的抑制作用。
　　2.2作用48h各含藥血清組相比較
　

4、　（1）空白組OD值明顯高于多苷1號組；多苷2號組OD值低于空白組；
　　（2）黃酮1號組 OD值明顯高于多苷1號組，統(tǒng)計學(xué)分析有顯著差異；黃酮2號組OD值高于多苷2號組，具有統(tǒng)計學(xué)差異。提示菟絲子黃酮可對抗GTW對生精細胞增殖的抑制作用。
　　2.3各組48hOD值較24h均有不同程度的增長，其中多苷1號組和多苷2號組增長幅度較大。
　　3.含藥血清對幼年大鼠睪丸生精細胞細胞周期的影響
　　3.1在細胞倍體百分

5、比中
　?。?）空白組單倍體百分比高于多苷1號組和多苷2號組，而二倍體及四倍體百分比低于多苷1號組和多苷2號組，統(tǒng)計學(xué)分析具有顯著差異。
　?。?）多苷1號組的單倍體和二倍體百分比高于多苷2號組，而四倍體百分比低于多苷2號組，無明顯統(tǒng)計學(xué)差異。
　　（3）黃酮1號組單倍體百分比明顯高于多苷1號組，其二倍體及四倍體百分比低于多苷1號組；黃酮2號組單倍體百分比高于多苷2號組，其二倍體百分比低于多苷2號組，四倍體百分比低于多

6、苷2號組。提示菟絲子黃酮可以對抗 GTW對大鼠睪丸生精功能的抑制作用。
　　3.2在細胞倍體間比率中
　?。?）多苷1號組及多苷2號組在1C:4C和1C:2C中均明顯低于空白組。
　?。?）在1C:2C中，多苷1號組明顯高于多苷2號組。黃酮1號組稍高于多苷1號組，統(tǒng)計學(xué)分析具有顯著差異，黃酮2號組明顯高于多苷2號組，具有顯著統(tǒng)計學(xué)差異。
　?。?）在4C:2C中，各組間比較無明顯統(tǒng)計學(xué)意義。
　　3.3在各

7、組間S期細胞百分?jǐn)?shù)的比較中：空白組高于多苷1號組及多苷2號組；多苷1號組稍低于多苷2號組及黃酮1號組，統(tǒng)計學(xué)分析無顯著差異；多苷2號組低于黃酮2號組，無明顯統(tǒng)計學(xué)差異。提示GTW作用后，細胞S期生精細胞數(shù)量明顯減少。
　　4.含藥血清對幼年大鼠睪丸生精細胞細胞凋亡的影響:與空白組相比，多苷1號組和多苷2號組細胞凋亡比率均升高；多苷1號組細胞凋亡比率稍低于多苷2號組，統(tǒng)計學(xué)無顯著差異；黃酮1號組細胞凋亡比率稍低于多苷1號組；黃酮2號