DAXX抑制大鼠頸動脈球囊損傷后平滑肌細(xì)胞增殖的作用及機(jī)制.pdf

1、目的：通過觀察DAXX對球囊損傷后血管平滑肌細(xì)胞增殖的抑制作用，探討其發(fā)生機(jī)制,為延緩血管狹窄的病理改變提供理論依據(jù)。
　　方法：從南華大學(xué)動物中心取雄性大鼠（400g±100g）52只，構(gòu)建頸總動脈球囊損傷血管狹窄動物模型，運(yùn)用脂質(zhì)體局部轉(zhuǎn)染DAXX質(zhì)粒，隨機(jī)分為4組：假手術(shù)組、手術(shù)組、空轉(zhuǎn)染組、轉(zhuǎn)染組。于術(shù)后30分、1小時、2小時、6小時、24小時取球囊損傷后的大鼠頸總動脈標(biāo)本，用于免疫組化檢測DAXX及JNK的時序性；于術(shù)后

2、7天及14天每組各取4只大鼠頸總動脈標(biāo)本，HE染色測量內(nèi)膜中膜比值觀察血管狹窄程度、免疫組化檢測抗原蛋白及PCR檢測mRNA的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：大鼠頸總動脈球囊損傷后，局部轉(zhuǎn)染DAXX7天及14天后，測PCR及免疫組化，可知轉(zhuǎn)染組較手術(shù)組DAXX表達(dá)均明顯增加，表明轉(zhuǎn)染成功。手術(shù)后7天及14天組織切片HE染色顯示：手術(shù)組較正常組平滑肌細(xì)胞增殖明顯，管壁增厚，管腔狹窄，且14天較7天增殖更為明顯，手術(shù)組與空轉(zhuǎn)染組基本相同；提示模

3、型構(gòu)建成功。相較于手術(shù)組，轉(zhuǎn)染組平滑肌細(xì)胞增殖明顯減少，內(nèi)膜層增厚程度大為減輕，管腔相對通暢，通過觀察內(nèi)膜/中膜面積的比值發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染組比手術(shù)組比值明顯降低，這就說明DAXX能有效抑制平滑肌細(xì)胞增殖、延緩血管狹窄。另PCR檢測DAXX及JNK基因轉(zhuǎn)錄，結(jié)果顯示：與正常組相比，手術(shù)組平滑肌細(xì)胞中DAXX及JNK的mRNA顯著增多（P小于0.05），提示手術(shù)使DAXX及JNK的mRNA表達(dá)上調(diào)；而相對于手術(shù)組，轉(zhuǎn)染組DAXX及JNK的mRNA表

4、達(dá)上調(diào)更為顯著（P小于0.05）。同時利用免疫組化方法檢測發(fā)現(xiàn)：與正常組相比，手術(shù)組和空轉(zhuǎn)染組平滑肌細(xì)胞中DAXX及JNK抗原蛋白的表達(dá)有所上升，說明血管損傷誘導(dǎo)DAXX及JNK蛋白表達(dá)上調(diào)；轉(zhuǎn)染組DAXX及JNK的表達(dá)上升更為顯著，表明局部轉(zhuǎn)染后促進(jìn)DAXX及JNK蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)論:球囊刺激可誘導(dǎo)平滑肌細(xì)胞中DAXX的表達(dá)，并且其表達(dá)呈時序性；DAXX可以抑制血管平滑肌細(xì)胞增殖、有效延緩血管狹窄；其抑制作用可能與上調(diào)JNK