大鼠胰島β細胞分離與培養(yǎng)的初步研究.pdf

1、目的:探索胰島β細胞分離純化的方法，尋找大鼠胰島β細胞體外原代培養(yǎng)的適宜條件。 方法:選用正常喂養(yǎng)的Wistar大鼠(雌雄不限，7-8周齡，體重250-300克)，采用經膽總管插管注入膠原酶的方法對大鼠胰腺進行消化，然后分別以20目和80目的不銹鋼網篩過濾初步純化胰島，雙硫腙染色及葡萄糖刺激試驗鑒定胰島及其活性。分離純化后的胰島在RPMI-1640培養(yǎng)基中過夜培養(yǎng)。培養(yǎng)后的胰島經洗滌沉降等處理后，以胰蛋白酶和DNA酶再次消化，形

2、成胰島的單細胞懸液。將單細胞懸液置于2.8mmol/L葡萄糖液，用流式細胞儀(BD FACSAria)以100mw，488nm的激光照射，分選510nm～550nm處的細胞。用免疫組織化學染色法及不同濃度葡萄糖刺激試驗鑒定分選細胞及其活性，將所分選β細胞置于不同葡萄糖和IBMX.濃度的Ham’s F-10培養(yǎng)基中培養(yǎng)，觀察IBMX對β細胞活性的影響。 結果:實驗大鼠胰腺經過膠原酶消化和初步純化后，平均每只大鼠可獲得550±95個

3、胰島，DTZ染色及葡萄糖刺激試驗證明胰島活性良好。進行：FACS后，平均每只大鼠可得到約5688個β細胞，回收率為93.69％，分離純度為85.5％。將β細胞置于不同濃度葡萄糖和IBMX的：Ham’sF-10培養(yǎng)基中，在較高濃度葡萄糖條件下(10.0mmol/L，及16.0mmol/L)，β細胞活性較高，死亡和凋亡也較少。未觀察到IBMX對β細胞活性的影響。 結論: 1、從正常喂養(yǎng)的健康大鼠分離純化所得的胰島經過胰蛋白酶