嗜肺軍團(tuán)菌mip基因DNA疫苗初步研究.pdf

1、該研究選擇了嗜肺軍團(tuán)菌DNA疫苗這一研究領(lǐng)域,在查閱國(guó)內(nèi)外大量文獻(xiàn)的基礎(chǔ)上,選擇嗜肺軍團(tuán)菌mip基因作為候選疫苗基因,并首次設(shè)計(jì)將mip基因與佐劑分子CTB聯(lián)合使用.希望能為研制安全、有效的軍團(tuán)菌疫苗提供科學(xué)依據(jù)和研究基礎(chǔ).該研究共分為四部分進(jìn)行:第一部分,以嗜肺軍團(tuán)菌L1株和霍亂弧菌569B株基因組DNA為模板,通過(guò)PCR擴(kuò)增獲得了嗜肺軍團(tuán)菌828bp的mip基因和霍亂弧菌376bp的ctxB基因.第二部分,將mip基因和ctxB基因

2、定向克隆入真核表達(dá)載體pcDNA3.1(+),構(gòu)建mip基因和ctxB基因真核表達(dá)重組質(zhì)粒pcDNA3.1-mip、pcDNA3.1-ctxB和mip/ctxB融合基因真核表達(dá)重組質(zhì)粒pcDNA3.1-mip/ctxB,將pcDNA3.1-mip、pcDNA3.1-ctxB和pcDNA3.1-mip、pcDNA3.1-mip/ctxB體外轉(zhuǎn)染NIH3T3細(xì)胞后,用免疫熒光法檢測(cè)到有效的瞬時(shí)表達(dá),并用western印跡檢測(cè)到轉(zhuǎn)染的陽(yáng)性細(xì)胞

3、克隆穩(wěn)定表達(dá)出的24kDa、11kDa和35kDa的蛋白.第三部分,將構(gòu)建的真核表達(dá)重組質(zhì)粒用作DNA疫苗免疫BALB/c小鼠,檢測(cè)免疫小鼠體內(nèi)抗原特異性抗體水平、脾淋巴細(xì)胞增殖活性、IFN-γ產(chǎn)生水平、CTL殺傷活性等指標(biāo),評(píng)價(jià)疫苗的免疫原性.第四部分,將構(gòu)建的真核表達(dá)重組質(zhì)粒用作DNA疫苗免疫BALB/c小鼠,加強(qiáng)免疫后,用嗜肺軍團(tuán)菌L1菌株對(duì)免疫小鼠進(jìn)行攻擊,攻擊28天后檢測(cè)肺組織培養(yǎng)帶菌量和肺組織病理形態(tài)學(xué)變化,評(píng)價(jià)疫苗對(duì)動(dòng)物的