縫隙連接Cx43在腦微血管痙攣中作用的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：
　　縫隙連接（gap junction,GJ）在血管舒縮，尤其是在調(diào)節(jié)平滑肌方面發(fā)揮了重要作用，而縫隙連接蛋白（Cx）是縫隙連接發(fā)揮功能的基礎(chǔ)。我們課題組重點(diǎn)在Cx43參與蛛網(wǎng)膜下腔出血（SAH）后腦血管痙攣（CVS）的研究中，前期研究表明，Cx43主要通過(guò)調(diào)節(jié)血管的收縮參與SAH后CVS的進(jìn)展.但影像學(xué)上的CVS和延遲性缺血性神經(jīng)功能障礙（DIND）臨床表現(xiàn)并不完全相符，并且Cx43蛋白還廣泛存在于微血管，故本研究假設(shè)S

2、AH后微血管的痙攣與微血管中Cx43的表達(dá)密切相關(guān)。為驗(yàn)證假設(shè)，本實(shí)驗(yàn)通過(guò)使用二次注血的SAH大鼠模型，在動(dòng)物體內(nèi)研究Cx43的表達(dá)是否參與SAH微血管痙攣的調(diào)節(jié)及進(jìn)一步深入了解其作用機(jī)制。
　　方法：
　　1、二次注血的SAH模型建立：用普通級(jí)SD大鼠，行腹腔麻醉，尾靜脈取血大概0.3ml備用，體式顯微鏡下枕大池穿刺，見(jiàn)有清亮腦脊液流出后，將尾靜脈血注入，次日同時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行二次注血，從而完成造模過(guò)程。
　　2、SD大鼠

3、模型分組：正常組、SAH3天、7天組和腺病毒預(yù)處理的SAH3天、7天組。采用western blot、免疫組化檢測(cè)各組大腦中動(dòng)脈外側(cè)裂向頂葉部延伸段末側(cè)分支血管（直徑20～80um）Cx43的表達(dá)水平變化；HE染色光鏡下觀察血管的收縮形態(tài)、內(nèi)徑變化、平滑肌細(xì)胞等相關(guān)病理變化。
　　3、活體熒光顯微鏡檢測(cè)：模型分組同上，通過(guò)尾靜脈注入FITC-Dextran（標(biāo)記血小板），采用活體熒光顯微鏡檢測(cè)大腦中動(dòng)脈分支微血管的直徑變化，對(duì)比分

4、析各組之間微血管的痙攣數(shù)量、痙攣程度。
　　結(jié)果：
　　1、成功建立二次注血SAH模型，通過(guò)光鏡觀察提示大腦中動(dòng)脈分支微血管管腔狹窄、增厚程度不同、內(nèi)皮細(xì)胞水腫、變形，平滑肌細(xì)胞變性壞死，排列紊亂，平滑肌層增厚。
　　2、Cx43的表達(dá)存在不同的變化，western blot檢測(cè)SAH后Cx43表達(dá)量在持續(xù)增加，在7d時(shí)達(dá)到一個(gè)峰值。而加入腺病毒預(yù)處理組Cx43表達(dá)量相對(duì)于SAH組有下降。免疫組化提示SAH后在內(nèi)皮、平

5、滑肌、外膜層以看到明顯的棕黃染色的Cx43陽(yáng)性表達(dá)，而腺病毒預(yù)處理組同SAH組比較，Cx43陽(yáng)性表達(dá)量有所下降。
　　3、SAH組的血管痙攣數(shù)量和血管痙程度逐漸上升，在7day時(shí)達(dá)到高峰，腺病毒預(yù)處理組較SAH對(duì)照組血管痙攣數(shù)量和程度均有所下降。
　　結(jié)論：
　　1、SAH后微動(dòng)脈上Cx43表達(dá)量逐漸升高，在7天達(dá)到峰值。
　　2、使用siRNA-Cx43腺病毒特異性下調(diào)Cx43表達(dá)能有效的減少微血管痙攣數(shù)量、緩