回腸間置術(shù)后GK大鼠胰島β細(xì)胞的增生-再生及其機(jī)制的研究.pdf

1、[目的] 觀察和研究GK大鼠回腸間置術(shù)后，胰島結(jié)構(gòu)及胰島細(xì)胞的組織病理、形態(tài)學(xué)變化，胰島素表達(dá)情況和Notch1、Ngn3等基因的表達(dá)量的變化，初步探討GK大鼠回腸間置術(shù)后胰島細(xì)胞的增生/再生及其分子生物學(xué)機(jī)制。
　　 [方法]取12周齡的雄性GK大鼠30只隨機(jī)分為3組:手術(shù)組(IT);假手術(shù)飲食控制組(C);假手術(shù)空白對(duì)照組(B)。每組各取大鼠10只，IT組行回腸間置術(shù);C組及B組均行假手術(shù)。術(shù)后IT組及B組大鼠均給予足量飼料

2、，自由進(jìn)食;C組予以限制飲食，飼料量按IT組前日進(jìn)食量的均值給予。術(shù)后每周測(cè)定大鼠空腹血糖及OGTT各時(shí)間點(diǎn)血糖。8周后處死，取胰腺用HE染色、Insulin免疫組化染色方法觀察其組織病理學(xué)變化，用RT-PCR方法檢測(cè)其Notch1及Ngn3基因表達(dá)量的變化。采集實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，用SPSS17.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，統(tǒng)計(jì)結(jié)果以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 [結(jié)果]
　　 1.各組術(shù)后大鼠空腹血糖及糖耐量改變
　　

3、 術(shù)前各組間GK大鼠空腹血糖(FPG)及OGTT曲線下面積(AUC)均無(wú)顯著差異。術(shù)后第1周，各組大鼠空腹血糖均有下降，各組與術(shù)前比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但I(xiàn)T組FPG為(8.20±2.41)mmol/L，明顯低于C組與B組，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。自術(shù)后第2周開(kāi)始，B組與C組大鼠空腹血糖逐漸回升，并分別于術(shù)后第3周、第4周回升至術(shù)前水平，而IT組血糖水平僅有輕度的回升，至術(shù)后第8周FPG為(10.13±2.17) mmol/L，仍明顯低于

4、術(shù)前水平(17.77±2.94)mmol/L，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。IT組大鼠術(shù)后糖耐量明顯改善，OGTT曲線下面積(AUC)術(shù)后第4、8周分別為(57.84±3.81)、(55.62±3.35)，較術(shù)前(70.66±4.30)明顯下降，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。而C、B組較術(shù)前無(wú)明顯改變，IT組與C、B組術(shù)后各時(shí)間點(diǎn)差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 2.胰島結(jié)構(gòu)及胰島細(xì)胞組織病理、形態(tài)學(xué)變化
　　 C組及B組胰島結(jié)構(gòu)及胰島細(xì)胞組織

5、病理學(xué)變化相似。均可見(jiàn)胰島數(shù)量減少，大量胰島間質(zhì)纖維化、結(jié)構(gòu)破壞嚴(yán)重;胰島內(nèi)β細(xì)胞聚集成團(tuán)的形態(tài)被破壞，離散分布;大量胰島β細(xì)胞腫脹變形，空泡樣變甚至凋亡。而IT組中大鼠胰島數(shù)量較多，胰島間質(zhì)纖維化、結(jié)構(gòu)破壞較少見(jiàn);胰島內(nèi)細(xì)胞排列緊密，以β細(xì)胞為核心聚集成團(tuán);胰島內(nèi)β細(xì)胞肥大、增厚，數(shù)量增多。另外可發(fā)現(xiàn)少量胰島細(xì)胞（2-10個(gè)）聚集成團(tuán)或單獨(dú)存在并入或緊貼胰腺導(dǎo)管或腺泡細(xì)胞分布。
　　 3.各組術(shù)后胰島素表達(dá)情況
　　

6、IT組多數(shù)胰島insulin染色呈棕黃色至棕紅色，染色強(qiáng)度均勻一致，胞漿充滿。而C組和B組，胰島內(nèi)insulin染色著色不均，部分細(xì)胞因嚴(yán)重空泡樣變、凋亡而不著色。隨機(jī)高倍鏡下陽(yáng)性細(xì)胞面積IT組為(12.70±3.59％)，顯著高于C組(4.91±0.91)％、B組(4.43±1.23)％，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。IT組OD值為(107.46±22.23)，顯著低于C組(157.31±9.18)、B組(160.38±11.38)，差異均有統(tǒng)

7、計(jì)學(xué)意義。
　　 4.各組術(shù)后Notch1基因的表達(dá)情況
　　 相較內(nèi)參β-actin，IT組大鼠Notch1基因相對(duì)表達(dá)量為(0.6309±0.0586)，C組及B組大鼠Notch1基因相對(duì)表達(dá)量分別為(0.8246±0.0353)、(0.8185±0.0269)。IT組較C、B組均明顯下調(diào)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 [結(jié)論]
　　 1.回腸間置術(shù)后大鼠空腹血糖水平降低并維持在較低水平，同時(shí)糖耐量也得

8、到較好的改善，回腸間置術(shù)可顯著改善GK大鼠血糖代謝。
　　 2.回腸間置術(shù)后可阻止和預(yù)防GK大鼠胰島間質(zhì)纖維化，維持胰島結(jié)構(gòu)完整，及胰島β細(xì)胞正常排列關(guān)系;明顯促進(jìn)胰島β細(xì)胞的增生/再生，并出現(xiàn)腺泡細(xì)胞和導(dǎo)管細(xì)胞向胰島β細(xì)胞的轉(zhuǎn)分化的可能，這可能是GK大鼠術(shù)后胰島功能改善和血糖代謝改善的機(jī)制之一。
　　 3.回腸間置術(shù)后明顯下調(diào)Notch1基因表達(dá)，抑制過(guò)度活化的Notch信號(hào)通路，促進(jìn)胰島β細(xì)胞的增生/再生，抑制β細(xì)胞