仙茅組織培養(yǎng)和人工種子研究.pdf

1、仙茅是我國一味使用了千年的中藥，主要治療陽痿、筋骨萎軟、腰膝冷痹、陽虛冷瀉等癥狀，是非常寶貴的中藥材。野生仙茅因人為和牲畜的破壞，導(dǎo)致數(shù)量急劇減少;但其作為中藥材和保健品原料，市場需求卻越來越大，野生仙茅數(shù)量已經(jīng)無法滿足人們的需要;目前人工方法栽培仙茅已經(jīng)表現(xiàn)出極大的現(xiàn)實經(jīng)濟價值。傳統(tǒng)培育仙茅的方式工作量大，成活率低，且浪費了大量優(yōu)質(zhì)仙茅。本論文研究了仙茅更高效、便捷的繁育方式，利用植物組織培養(yǎng)育苗和人工種子技術(shù)育苗，在一定程度上解決了

2、仙茅產(chǎn)量不足的問題，具有較大的現(xiàn)實意義。
　　本論文來源于國家林業(yè)公益性行業(yè)科研專項項目《仙茅、雞血藤資源培育及林下種植技術(shù)研究》，項目編號201304807。目前市場上仙茅的品種很多，本研究基于的是栽培于廣州從化的四川宜賓野生仙茅。通過設(shè)置單因素試驗、正交試驗等探究了快速得到仙茅植株的三條途徑。以仙茅幼葉誘導(dǎo)愈傷組織得到完整植株;由不定芽制作人工種子得到完整植株;利用仙茅的細胞懸浮培養(yǎng)，誘導(dǎo)出胚狀體制作人工種子，以得到完整植株。

3、實驗結(jié)果證明三種方式均具有可行性:
　　正交試驗和單因素試驗結(jié)果表明，MS基本培養(yǎng)基中加入0.1mg/L的2，4-D、1.5mg/L的KT，3％的多菌靈和8mg/L的檸檬酸，誘導(dǎo)出的仙茅愈傷組織效果最好，可達96％。方差分析得知2，4-D、KT、多菌靈的濃度對仙茅出愈率的影響差異極顯著，6-BA濃度和NAA濃度對出愈率影響差異極顯著。繼代培養(yǎng)基為MS加入0.3mg/L的NAA，2mg/L的6-BA，0.3mg/L的2，4-D，繼代

4、效果最好，增殖率最高，愈傷組織的質(zhì)量最好，較易誘導(dǎo)出不定芽。在培養(yǎng)基中添加0.3mg/L的NAA有利于生根，移栽至營養(yǎng)土中的成活率可達到90％以上。
　　在人工胚乳中加入0.05 mg/L6-BA，0.8mg/L NAA制作的人工種子萌發(fā)率可達到93％，添加3mg/L多菌靈時人工種子的染菌率最低。對比試驗表明包兩層膜的人工種子比包一層膜的人工種子，保水性和機械性都更好。當海藻酸鈉濃度為3％時，制作的人工種子質(zhì)量最好，大小相同，軟硬

5、合適。以2％的CaCl2為固化劑，反應(yīng)兩次，第一次固化5分鐘，第二次固化10分鐘，制成的人工種子形態(tài)狀況最好，顆粒均勻，軟硬適中，呈球形，透明有彈性。
　　愈傷組織繼代時，培養(yǎng)基蔗糖濃度為15g/L，6-BA濃度為2mg/L、NAA濃度為0.5mg/L時，可得到疏松易碎適合做懸浮細胞的愈傷組織。正交試驗探究非激素水平對細胞懸浮培養(yǎng)影響結(jié)果表明:蔗糖影響懸浮細胞形態(tài)，MES對懸浮培養(yǎng)液的PH值影響較大，對數(shù)據(jù)進行方差分析得知，不同濃

6、度的蔗糖、水解酪蛋白、MES、脯氨酸對仙茅細胞懸浮培養(yǎng)影響的差異極顯著。探究激素對細胞懸浮培養(yǎng)的影響時發(fā)現(xiàn)，2，4-D影響懸浮細胞結(jié)構(gòu)，當2，4-D濃度為0.5mg/L時，胚性細胞數(shù)量達到最大值。細胞的生長隨著培養(yǎng)時間的變化呈現(xiàn)“S”形曲線，接種量對懸浮培養(yǎng)的影響最大，接種量為15％是仙茅細胞懸浮培養(yǎng)的最適接種量。
　　本論文以組織培養(yǎng)育苗，替代傳統(tǒng)的根莖繁殖，成功建立了仙茅組織培養(yǎng)繁殖體系，可將其應(yīng)用于仙茅的大規(guī)模生產(chǎn)，解決目前