真核細(xì)胞翻譯起始因子4E在慢性粒細(xì)胞白血病中的作用研究.pdf

1、第一部分EIF4E在白血病和淋巴瘤細(xì)胞系中的表達(dá) 目的:探討真核細(xì)胞翻譯起始因子4E(EIF4E)在人白血病和淋巴瘤細(xì)胞系中的表達(dá)。 方法:采用RT-PCR和western-blot方法研究了6株人白血病、淋巴瘤細(xì)胞系(人急性單核細(xì)胞白血病細(xì)胞系U937，人急性早幼粒細(xì)胞白血病系HL60，人慢性粒細(xì)胞白血病細(xì)胞系K562，人急性淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞系Molt-4，人Burkit淋巴瘤細(xì)胞系Raji和Daudi)和正常人外周

2、血單個(gè)核細(xì)胞EIF4E的表達(dá)。 結(jié)論:EIF4E可能在白血病和淋巴瘤的發(fā)生發(fā)展中起一定作用。 第二部分正、反義EIF4E真核表達(dá)載體的構(gòu)建及鑒定 目的:構(gòu)建正、反義人全長(zhǎng)EIF4E基因真核表達(dá)質(zhì)粒，為研究EIF4E基因功能提供工具。 方法:根據(jù)EIF4E基因cDNA序列中編碼序列，設(shè)計(jì)PCR引物，在上下游引物5'端分別添加ApaⅠ和KpnⅠ酶切位點(diǎn)，RT-PCR從K562細(xì)胞中獲得760bp的DNA片斷，

3、然后將該片斷正、反向插入真核表達(dá)載體pEGFP-C1的多克隆位點(diǎn)，構(gòu)建正、反義EIF4E基因片斷真核表達(dá)質(zhì)粒，并用PCR、酶切法和DNA測(cè)序鑒定。 結(jié)論:通過(guò)基因克隆技術(shù)，成功構(gòu)建了正、反義EIF4E基因真核表達(dá)質(zhì)粒，為進(jìn)一步研究EIF4E基因功能提供了實(shí)驗(yàn)工具。 第三部分EIF4E對(duì)慢性粒細(xì)胞白血病細(xì)胞增殖的影響 目的:翻譯控制在腫瘤細(xì)胞早期發(fā)展、分化和細(xì)胞周期過(guò)程中起著重要的作用。翻譯起始因子是真核細(xì)胞翻譯過(guò)

4、程的限速因子，在CML患者白血病細(xì)胞和CML細(xì)胞系K562中高表達(dá)。本文旨在研究EIF4E對(duì)CML細(xì)胞增殖的影響。 方法:正、反義重組EIF4E質(zhì)粒電轉(zhuǎn)染至K562細(xì)胞中，采用G418穩(wěn)定篩選轉(zhuǎn)染正義EIF4E質(zhì)粒(pEIF4E)的穩(wěn)定細(xì)胞系，流式細(xì)胞儀分選瞬時(shí)轉(zhuǎn)染反義EIF4E質(zhì)粒(pEIF4Eas)的細(xì)胞。通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)和熒光顯微鏡觀察確定細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率，RT-PCR，western-blot和免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)EIF4E蛋白和

5、mRNA水平的改變。體外觀察EIF4E表達(dá)改變對(duì)K562細(xì)胞周期、增殖和cyclinD1表達(dá)的影響。 結(jié)論:EIF4E基因在慢性粒細(xì)胞白血病細(xì)胞系K562的細(xì)胞增殖中起重要作用，其表達(dá)增高促進(jìn)K562細(xì)胞的增殖。 第四部分EIF4E對(duì)慢性粒細(xì)胞白血病細(xì)胞分化的影響 目的:研究表明，EIF4E不僅和腫瘤細(xì)胞的惡性增殖密切有關(guān)，還與某些腫瘤細(xì)胞的分化密切相關(guān)，多數(shù)情況下，EIF4E表達(dá)上調(diào)可阻滯腫瘤細(xì)胞的誘導(dǎo)分化。失

6、分化和惡性增殖是白血病細(xì)胞的特征，為此，我們研究了EIF4E在誘導(dǎo)慢性粒細(xì)胞白血病細(xì)胞分化中的作用。 方法:以pEIF4E/K562、pEGFP-C1/K562和K562細(xì)胞為研究對(duì)象，分別以Hu、TPA和HMBA為誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)向紅細(xì)胞系、巨核細(xì)胞系及單核巨噬系分化。采用瑞氏－姬姆薩染色觀察細(xì)胞誘導(dǎo)前后形態(tài)改變，并采用聯(lián)苯胺染色、CD41和CD14的表達(dá)率分別檢測(cè)誘導(dǎo)后紅系祖細(xì)胞、巨核細(xì)胞和單核細(xì)胞的表達(dá)率。 結(jié)論:EIF