PPARγ激動劑對雨蛙肽誘導(dǎo)急性胰腺炎的預(yù)防及其機制的實驗性研究.pdf

1、目的：急性胰腺炎（acute pancereatitis，AP）為臨床常見急腹癥，發(fā)病率逐年升高。AP發(fā)病機制比較復(fù)雜，病程發(fā)展快，治療難度大。過氧化物酶體增殖物激活受體γ（peroxisome proliferator activated receptorγ，PPARγ）是一類配體依賴的轉(zhuǎn)錄因子，研究發(fā)現(xiàn)PPARγ參與細胞增殖和炎癥反應(yīng)，可調(diào)節(jié)炎癥相關(guān)基因表達，參與機體炎癥反應(yīng)過程，其可能是AP治療新的靶點。核因-кB（nuclear

2、 factor-kappa B，NF-кB）是一種多效性核轉(zhuǎn)錄因子，可在基因水平調(diào)控炎性因子表達，NF-кB的活化是AP發(fā)生發(fā)展以及全身炎癥反應(yīng)級聯(lián)擴大的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。有研究發(fā)現(xiàn)PPARγ參與抗炎作用可能與抑制NF-кB活化有關(guān)。本課題旨在研究PPARγ高選擇性激動劑羅格列酮（rosiglitazone，ROS）對雨蛙肽誘導(dǎo)的小鼠AP發(fā)生發(fā)展的影響并對其作用機制進行初步探討。 方法：健康雄性昆明小鼠72只，體重30±2g，隨機分為3

3、組：（1）急性胰腺炎組（AP組）：將雨蛙肽溶于生理鹽水，腹腔內(nèi)注射（50ug/kg），一小時注射一次，注射7次。（2）羅格列酮預(yù)處理組（AP-ROS組）：羅格列酮溶于生理鹽水，按10mg/kg在雨蛙肽注射前1h腹腔注射。（3）生理鹽水組（NS組）：以相同容積生理鹽水腹腔內(nèi)注射，一小時注射一次，注射7次。分別于術(shù)后6h、12h和24h三時段摘眼球取血并處死小鼠（每組各時段8只），收集血清、胰腺和肝組織。測定血清淀粉酶、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（A

4、LT）和天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）水平。取胰腺組織分三份：①石蠟切片HE染色，鏡下病理評分；②測定胰腺組織含水量③采用RT-PCR和Western blot技術(shù)檢測PPARγ和NF-кB表達。取肝臟組織用RT-PCR和Western blot技術(shù)檢測PPARγ和NF-кB表達。 結(jié)果：1．血清淀粉酶水平血清淀粉酶水平在NS組各時間點沒有顯著變化，均低于其他組（P<0．01），而在AP組各時間點均增高，12h升高最顯著，明顯高

5、于同時點AP-ROS組（P<0．01）。2．血清ALT和AST水平 NS組血清ALT和AST水平各時點沒有顯著變化，均低于其他組（P<0．01），AP組小鼠血清ALT和AST水平各時點均升高，12h升高最顯著，與AP-ROS組同時段相比均升高（P<0．01或P<0．05）3．胰腺組織含水量變化 AP組和AP-ROS組各時點胰腺組織含水量與NS組相比均增高（P<0．01），AP-ROS組與AP組相比較，胰腺組織含水量均較低（P<0．05）

6、。4．胰腺組織病理學(xué)結(jié)果 NS組各時間點胰腺組織未見異常。AP組光鏡下可見胰腺間質(zhì)水腫，大量中性粒細胞和單核細胞浸潤，彌漫性出血和局部壞死，AP-ROS組胰腺組織病變程度明顯減輕。5．胰腺組織內(nèi)PPARγ和NF-кKBmRNA測定 AP-ROS組胰腺組織PPAR mRNA表達水平在造模后6h、12h和24h均升高，明顯高于同時點AP組（P<0．05）。AP組胰腺組織NF-кBmRNA表達水平在各時點較NS組均升高（P<0．01），AP-

7、ROS組胰腺組織NF-кBmRNA表達的變化趨勢與AP組相似，但均低于同時段AP組（P<0．05）。6．胰腺組織PPARγ和NF-кB p65蛋白測定 Western blotting檢測小鼠胰腺組織內(nèi)PPARγ表達結(jié)果：AP-ROS組胰腺組織PPARγ在各時點表達均增加，均高于同時點AP組和NS組（P<0．01）。胰腺組織NF-кB在各時點表達結(jié)果均為：AP組>AP-ROS組>NS組（P<0．01）。7．肝臟組織PPARγ mRNA和

8、NF-кB mRNA測定 AP-ROS組肝臟組織PPARγ mRNA表達水平在各時點均升高，明顯高于同時段AP組（P<0．01）。AP組肝臟組織NF-кB mRNA表達水平在各時點均升高，AP-ROS組肝臟組織。NF-кBmRNA表達的變化趨勢與AP組相似，但均低于同時段AP組（P<0．01）．8肝臟組織PPARγ和NF-кBp65蛋白測定 Western blotting檢測小鼠肝臟組織各時點PPARγ，表達結(jié)果均為：AP-ROS組>

9、NS組>AP組（P<0．01）；肝臟組織NF-кB在各時點測的表達結(jié)果均為：AP組>AP-ROS組>NS組（P<0．01）。 結(jié)論：1．腹腔注射雨蛙肽能成功誘導(dǎo)小鼠AP模型，本模型操作方法簡單，易于成功。2．羅格列酮預(yù)處理可降低AP小鼠血清淀粉酶、ALT和AST水平，減少胰腺組織含水量，減輕胰腺損傷的病理程度，說明羅格列酮能減輕AP時胰腺和肝臟損傷。3．羅格列酮很可能通過增加AP的胰腺和肝臟組織PPARγ表達，減少炎癥細胞浸潤，