蟾酥脂質(zhì)微球注射液的研究.pdf

1、研究證實(shí)蟾酥抗癌有效成分多為脂溶性化合物，其中蟾毒靈、華蟾素毒基、脂蟾毒配基含量較多、活性較強(qiáng)。蟾酥靜脈給藥后在生物體內(nèi)分布廣泛，靜脈注射后容易引起過(guò)敏反應(yīng)，對(duì)于血管具有刺激性，同時(shí)會(huì)引起室性早搏等心臟不良反應(yīng)。本文研究具有藥物靶向治療作用的新劑型--蟾酥脂質(zhì)微球注射液，以期降低藥物對(duì)血管刺激性，避免有效成分被心臟攝取，提高藥物瘤體內(nèi)濃度。
　　 采用鑒別反應(yīng)及TLC法對(duì)蟾酥提取物進(jìn)行了鑒別；建立了蟾酥提取物和蟾酥脂質(zhì)微球注射液

2、中三個(gè)指標(biāo)成分蟾毒靈、華蟾毒配基、脂蟾毒配基的體外HPLC含量測(cè)定方法，試驗(yàn)結(jié)果表明上述方法專屬性強(qiáng)，方法準(zhǔn)確，可用于蟾酥提取物及蟾酥脂質(zhì)微球注射液的含量測(cè)定。
　　 采用單因素試驗(yàn)，以蟾毒靈、華蟾毒配基和脂蟾毒配基在提取物中含量及轉(zhuǎn)移率為指標(biāo)，考察了提取溶劑、粉碎粒度、提取時(shí)間對(duì)回流提取效果的影響。結(jié)果表明蟾酥藥材在60目以下，采用10倍量80％乙醇回流1小時(shí)為最佳提取工藝，提取物中三種指標(biāo)性成份百分含量和為27.54％，轉(zhuǎn)移

3、率為84.63％。
　　 考察了蟾酥指標(biāo)成分的基本理化性質(zhì)：指標(biāo)成分在水中的溶解度很低，屬于難溶性藥物；表觀油水分配系數(shù)呈pH依賴性，降低pH值會(huì)增加蟾毒配基在有機(jī)相中的分布；試驗(yàn)測(cè)定了三種指標(biāo)成分在不同pH降解行為，結(jié)果表明指標(biāo)成分在不同pH的水解速率均符合偽一級(jí)反應(yīng)動(dòng)力學(xué)，并根據(jù)反應(yīng)速率及活化能確定蟾毒靈、華蟾毒配基和脂蟾毒配基最穩(wěn)定pH值分別為6.5、5.8-6.5和6.5。
　　 采用兩級(jí)高壓均質(zhì)法制備蟾酥脂質(zhì)微

4、球注射液，以各種穩(wěn)定性參數(shù)(pH、平均粒徑及粒度分布、ζ-電位、游離脂肪酸、藥物分布、指標(biāo)成分、含量等)為指標(biāo)，對(duì)脂質(zhì)微球制備過(guò)程中主要工藝因素及處方因素進(jìn)行了研究，優(yōu)化出了高壓均質(zhì)條件、油相和乳化劑的組成及用量、pH值、不同滅菌方式、不同稀釋介質(zhì)對(duì)于制劑物理化學(xué)穩(wěn)定性的影響，試驗(yàn)證明粒子界面荷電性、空間位阻作用、pH、滅菌方式、藥物分布是影響蟾酥脂質(zhì)微球注射液的物理化學(xué)穩(wěn)定性的重要因素，并由以上考察結(jié)果確定了蟾酥脂質(zhì)微球注射液最終處方

5、及制備工藝：蟾酥提取物(0.14％)加入至由10％大豆油-中鏈油等比例構(gòu)成的油相中，加熱攪拌30min后通過(guò)0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，將大豆卵磷脂(1.2％)加入澄清的初次油相后繼續(xù)加熱攪拌；0.06％油酸鈉、2.5％甘油和0.005％EDTA-2Na加入適量注射用水中攪拌加熱至溶解后調(diào)節(jié)pH6.5，將油相在高速攪拌下緩緩加入水相中形成初乳；調(diào)節(jié)初乳pH至6.5并以注射用水定容至處方量，采用兩級(jí)高壓均質(zhì)法以70 MPa均質(zhì)4次，所得產(chǎn)品

6、填充氮?dú)夂笠孕D(zhuǎn)水浴100℃、30min滅菌。
　　 理化性質(zhì)測(cè)定顯示蟾酥脂質(zhì)微球注射液的平均粒徑165 nm，粒度分布55nm，ζ電位-36 mV，三種指標(biāo)成分在制劑中的包封率達(dá)80％以上；稀釋穩(wěn)定性試驗(yàn)表明蟾酥脂質(zhì)微球注射液在臨床使用時(shí)以葡萄糖注射液或氯化鈉注射液稀釋100倍以內(nèi)，在3 h內(nèi)使用是安全合理的。
　　 考察了蟾酥脂質(zhì)微球注射液在不同條件下的穩(wěn)定性。結(jié)果表明，基本理化指標(biāo)變化呈溫度依賴性：隨著貯藏溫度的上

7、升，游離脂肪酸含量增加，pH減小顯著，平均粒徑稍有增加，粒度分布明顯增大。根據(jù)制劑在三種溫度6個(gè)月下的考察結(jié)果，暫定本制劑應(yīng)在4-25℃下儲(chǔ)藏，不應(yīng)在較高溫度下長(zhǎng)時(shí)間放置。
　　 建立了大鼠血漿樣品中三種蟾酥指標(biāo)成分的HPLC測(cè)定方法，蟾酥脂質(zhì)微球注射液和蟾酥溶液劑大鼠股靜脈給藥后體內(nèi)藥時(shí)過(guò)程均符合雙隔室模型；非隔室模型計(jì)算顯示除V(c)外，兩組間主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)有顯著性差異(P<0.05)，其中以指標(biāo)成分計(jì)蟾酥脂質(zhì)微球組AUC是

8、溶液劑組的1.3倍，MIRT延長(zhǎng)了2.5倍；藥動(dòng)學(xué)試驗(yàn)中溶液劑組有3只大鼠死亡，脂質(zhì)微球組則全部存活，試驗(yàn)結(jié)果顯示蟾酥脂質(zhì)微球注射液同溶液劑比，顯著降低了藥物的毒副作用，延緩了藥物的釋放，使開(kāi)發(fā)出具一定長(zhǎng)效作用的蟾酥新型中藥制劑成為可能。
　　 采用高效液相梯度洗脫法分別建立了蟾酥藥材及其中間體和制劑的指紋圖譜。結(jié)果表明，藥材和制劑指紋圖譜方法學(xué)符合要求，10批藥材及制劑指紋圖譜共有峰的峰相對(duì)保留時(shí)間、相對(duì)峰峰面積、相對(duì)峰峰面積

9、比值與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜間偏差、非共有峰總峰面積等各項(xiàng)指標(biāo)均在指紋圖譜規(guī)定的范圍之內(nèi)，各批藥材及其中間體和制劑指紋圖譜間相關(guān)性良好。
　　 初步藥效學(xué)試驗(yàn)表明蟾酥脂質(zhì)微球注射液對(duì)由熱板引起的小鼠后足疼痛及醋酸引起的小鼠扭體反應(yīng)有明顯的抑制作用，可劑量依賴性的延長(zhǎng)小鼠的痛閾時(shí)間；體外抑制腫瘤細(xì)胞增殖試驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示蟾酥脂質(zhì)微球注射液對(duì)于不同腫瘤細(xì)胞具有良好的細(xì)胞毒作用，且這種作用呈現(xiàn)劑量依賴性，而對(duì)正常人外周血單核細(xì)胞沒(méi)有細(xì)胞毒作用；蟾酥脂