利用轉(zhuǎn)基因油菜籽栽培平菇安全性分析.pdf

1、本研究利用耐除草劑草甘膦的轉(zhuǎn)基因油菜RT73品系的油菜籽成分，作為培養(yǎng)基質(zhì)培養(yǎng)側(cè)耳——糙皮側(cè)耳(Pleurotus ostreatus Jacq．ex Fr.)，籍此研究轉(zhuǎn)基因RT73油菜籽成分對(duì)側(cè)耳生長(zhǎng)的影響，了解在側(cè)耳培養(yǎng)過(guò)程中轉(zhuǎn)基因油菜籽中DNA的降解情況、側(cè)耳酯酶同工酶和過(guò)氧化物酶同工酶的變化情況，明確轉(zhuǎn)基因油菜RT73品系的油菜籽成分對(duì)側(cè)耳菌絲體組織和子實(shí)體細(xì)胞內(nèi)DNA的影響，從而探討轉(zhuǎn)基因RT73油菜籽在側(cè)耳栽培生態(tài)系統(tǒng)中的

2、安全性問(wèn)題。 1．用含有轉(zhuǎn)基因RT73油菜籽的培養(yǎng)料栽培側(cè)耳，探索培養(yǎng)料中油菜籽粕含量對(duì)側(cè)耳生長(zhǎng)的影響，并觀察轉(zhuǎn)基因RT73油菜籽粕與非轉(zhuǎn)基因油菜籽粕培養(yǎng)料在產(chǎn)菇外觀形態(tài)等特性上的差異。結(jié)果表明，適當(dāng)油菜籽含量不影響菌絲長(zhǎng)勢(shì)、氣生菌絲爬壁能力，菌絲滿袋天數(shù)，出菇批次。轉(zhuǎn)基因RT73油菜籽粕與非轉(zhuǎn)基因油菜籽粕培養(yǎng)料在產(chǎn)菇外觀形態(tài)等特性上沒有太大差異，初步認(rèn)為，轉(zhuǎn)基因油菜籽粕可作為栽培側(cè)耳的配料。 2．利用轉(zhuǎn)基因RT73油菜

3、籽配制培養(yǎng)料栽培側(cè)耳，并利用了實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)，探索了側(cè)耳栽培過(guò)程中轉(zhuǎn)基因RT73油菜籽DNA的降解情況。液體培養(yǎng)液中外源片段最長(zhǎng)殘留時(shí)間可達(dá)20d。10％含量的固體培養(yǎng)料中，外源片段殘留時(shí)間可達(dá)130d；含量20％和30％的固體培養(yǎng)料中，外源片段殘留時(shí)間為280d。 3．本章節(jié)利用酯酶同工酶和過(guò)氧化物酶同工酶技術(shù)，對(duì)含轉(zhuǎn)基因油菜籽成分的培養(yǎng)料上培養(yǎng)的側(cè)耳進(jìn)行了研究分析。利用油菜籽DNA提取液配制的培養(yǎng)液培養(yǎng)的不同品種側(cè)耳菌絲

4、體，有的品種同工酶酶譜存在差異。不同含量的油菜籽配制的固體培養(yǎng)料栽培的側(cè)耳子實(shí)體，10％、20％油菜籽含量時(shí)同工酶酶譜沒有差異，30％油菜籽含量時(shí)同工酶酶譜則出現(xiàn)差異。總體來(lái)看，隨著油菜籽含量的增加，過(guò)氧化物酶同工酶的條帶增加，同工酶酶譜存在差異。 4．利用轉(zhuǎn)基因油菜籽栽培側(cè)耳過(guò)程中，側(cè)耳組織能夠接觸到轉(zhuǎn)基因油菜籽的外源DNA片段，因此探索側(cè)耳細(xì)胞是否會(huì)接受轉(zhuǎn)基因油菜籽外源DNA片段。利用PCR方法，在側(cè)耳菌種中普遍能檢測(cè)到了和

5、花椰菜花葉病毒(CaMV)35S啟動(dòng)子序列一致的35S205， 35S195， 35S165片段，而檢測(cè)不到35S101， 35S162， 35S273片段；個(gè)別品種檢測(cè)到了和農(nóng)桿菌終止子Nos序列一致的Nos 180核酸片段，但檢測(cè)不到Nos 165片段；用轉(zhuǎn)基因RT73油菜籽DNA提取液配制的培養(yǎng)液培養(yǎng)的菌絲與用轉(zhuǎn)基因RT73油菜籽配制的培養(yǎng)料培養(yǎng)的側(cè)耳子實(shí)體中，均未檢出35S101、35S162、Nos 165和Nos 180片段

6、。表明側(cè)耳培養(yǎng)過(guò)程中其細(xì)胞并未接受外源DNA片段。 5．利用轉(zhuǎn)基因RT73油菜籽成分配制的培養(yǎng)基培養(yǎng)的側(cè)耳菌絲體和子實(shí)體提取DNA，并進(jìn)行多態(tài)性分析，探索轉(zhuǎn)基因RT73油菜籽成分對(duì)側(cè)耳DNA的影響。GYM(glueose yeast medium)液體培養(yǎng)液、非轉(zhuǎn)基因油菜籽DNA提取液與GYM液體培養(yǎng)液配制的培養(yǎng)液(DGYM)、轉(zhuǎn)基因RT73油菜籽DNA提取液與GYM液體培養(yǎng)液配制的培養(yǎng)液(RGYM)中連續(xù)傳9代的茵絲體，馬鈴薯