消炎利膽軟膠囊嚙齒動物毒性試驗.pdf

1、目的： 通過消炎利膽軟膠囊嚙齒動物毒性試驗觀察毒性反應，推測毒性靶器官或靶組織，預測安全劑量范圍，為臨床研究提供參考信息。 方法： 急性毒性試驗：60只小鼠隨機分成6組對應l0.0g/kg、7.0g/kg、4.9g/kg3.4g/kg、2.4 g/kg、1.7 g/kg 6個濃度藥液，灌胃給藥，給藥當天詳細觀察給藥后動物的反應情況，然后每天早上8：00、下午14：00各觀測一次，連續(xù)觀察14d，以觀察動物在短時間

2、出現(xiàn)的毒性反應。 長期毒性試驗：120只大鼠隨機分成2.5 g/kg、1.0g/kg、0.25g/kg三個劑量組及溶媒組(橄欖油)，連續(xù)灌胃給藥3 m，觀察消炎利膽軟膠囊對大鼠一般狀態(tài)、體重、血液學、血液生化學及病理組織學的影響以及停藥2 w后上述指標改變的恢復情況。以觀察連續(xù)用藥對動物產(chǎn)生的毒性反應和嚴重程度，中毒時首先出現(xiàn)的癥狀，以及停藥后組織和功能損害的發(fā)展與恢復情況。 結果： 急性毒性試驗：各組動物死亡多

3、發(fā)生在藥后20 min至6 h內(nèi)，表現(xiàn)對刺激反應減弱或消失，呼吸困難，心跳漸弱，直至死亡。對死亡動物立即解剖，可見胃腸有尚未吸收的藥液。其余內(nèi)臟器官均未見明顯異常。其它各組存活動物給藥第l d亦有類似癥狀，但較輕。存活動物當天或次日即可進食，部分動物可有少量稀便，觀察14 d，體重隨周齡而增長，未見其它毒性反應。消炎利膽軟膠囊的小鼠半數(shù)致死量LD<,50>為4.82g/kg，95％置信區(qū)間為3.99～5.88 g/kg。 長期毒

4、性試驗：整個試驗過程沒有一個動物死亡。部分動物給藥后1～2 h內(nèi)，有促唾液、汗液分泌(口周及被毛濕潤)作用；各劑量組動物毛色晦暗，部分動物有脫毛現(xiàn)象。以上現(xiàn)象呈劑量效應關系，推測為藥物效應。 體重是體現(xiàn)動物生長發(fā)育及一般狀態(tài)比較敏感的重要指標，可反映受試物的綜合毒性效應。整個試驗過程，各組動物體重一直呈增長趨勢，不管給藥期還是恢復期均是如此。但給藥期各組動物體重增長速度不一致，各劑量組體重增長速度比溶媒組緩慢呈一定的劑量效應關系

5、，推測消炎利膽軟膠囊對大鼠體重增長有阻礙作用?；謴推谛坌源笫篌w重增長迅速，統(tǒng)計學檢驗結果表明，各組動物體重差異有統(tǒng)計學意義，即各組動物體重不一致，多重比較結果表明14、15 w高劑量組與溶媒組、低劑量組比較差異有統(tǒng)計學意義，其他各組之間差異沒有統(tǒng)計學意義，推測各組動物體重不一致是由于停藥時高劑量組體重低于其它各組較多造成的。雌性各劑量組大鼠體重增長恢復正常，各組動物體重差異沒有統(tǒng)計學意義，即各組動物體重增長水平一致。以上結果表明，消炎利

6、膽軟膠囊對動物體重增長有阻礙作用；當停止給藥，阻礙作用消失，動物體重增長可以恢復正常。 給藥期和恢復期各組動物飼料日消耗量差異沒有統(tǒng)計學意義，即整個試驗過程中各組動物飼料日消耗量一致。 血液學指標及血液生化學指標的變化，可反映受試物對各器官系統(tǒng)功能的影響。消炎利膽軟膠囊各劑量組血液學指標’WBC、NEU、MONO、EOS、PLT、PT的變化及血液生化學指標血清Na<'+>離子濃度、CR、ALT、TP、G、TG、CHOL的

7、變化呈一定的劑量依賴趨勢，提示可能屬于與受試物毒性、組織損傷相關的效應。WBC、NEU、MONO、EOS、PLT的增高主要見于各種感染引發(fā)的疾病、組織損傷或壞死、過敏反應、中毒反應、腫瘤及血液病。推斷本試驗各劑量組WBC、NEU、MONO、EOS、PLT的升高為受試物對動物產(chǎn)生的毒性所致。高劑量組動物血清Na<'+>離子濃度高于溶媒組動物，但其絕對數(shù)值只是比溶媒組高了不到一個百分點(0.9％)。肝細胞壞死或肝細胞通透性增加時，均可使血清

8、轉氨酶含量增加。因此，血清轉氨酶活性的高低與肝細胞受損的程度一致。血清轉氨酶活性的測定是反映肝細胞損害的敏感而重要的指標。而血清ALT增加是反映肝細胞損害的最敏感指標之一，本試驗各劑量組ALT不同程度升高應為藥物對肝臟的不良反應所造成。血清CHOL 增高、TG降低可能與肝細胞損害、膽汁淤積相關。本試驗上述血液學與血液生化指標的改變，可能與藥物的毒性效應特別是肝臟損害有關。TP分為ALB和G兩部分，主要功能是維持血漿膠體滲透壓、pH值、運

9、輸作用、營養(yǎng)作用、凝血和抗凝作用以及免疫作用。TP、G濃度相對增高，A/G比值變化并不大，推斷TP、G的變化生物學意義不大。CR是肌酸的代謝產(chǎn)物，血CR濃度異常升高與腎臟損害程度平行，本試驗給藥組CR濃度降低則可能生物學意義不大。恢復期后，大部分血液學指標及血液生化學指標都能恢復。高、中劑量組CR低于溶媒組，如前述生物學意義不大。高、中劑量組CHOL 高于溶媒組，但并未發(fā)現(xiàn)其它相關指標的明顯改變，推斷CHOL變化的生物學意義不大。臟器系

10、數(shù)的異?？赡苁鞘茉囄锒拘宰饔玫慕Y果。臟器系數(shù)增加可能是由于充血、水腫、增生或腫瘤等，臟器系數(shù)降低則可能是由于壞死、萎縮等。本試驗由于消炎利膽軟膠囊能明顯阻礙動物體重增長，盡管受試物對臟器無明顯毒性效應時亦可能出現(xiàn)臟器系數(shù)的增加，因此，應同時比較臟器絕對濕重的差異以排除可能的假象。消炎利膽軟膠囊致肝臟系數(shù)、肝濕重同時增加，應視為其毒性效應；腎臟系數(shù)、睪丸系數(shù)雖然增加，但濕重與溶媒組比較差異沒有統(tǒng)計學意義，可能是受試物阻礙動物體重增長而出現(xiàn)

11、的假象。中劑量組卵巢、子宮濕重低于溶媒組，但其它兩個用藥組并未見有與之趨勢相同的變化，推測非藥物因素所致。恢復期各組脾系數(shù)差異有統(tǒng)計學意義，多重比較各組之間差異沒有統(tǒng)計學意義，推測其生物學意義不大；各組腎系數(shù)差異有統(tǒng)計學意義，高劑量組高于中劑量組，推測為非藥物因素所致。其它各臟器系數(shù)各組之間差異沒有統(tǒng)計學意義。 病理學檢查是反映藥物毒性效應的形態(tài)學依據(jù)。不管是給藥期還是恢復期，剖解動物，各組動物臟器均沒有發(fā)現(xiàn)明顯的眼觀病變。給藥

12、期高劑量組(17只/20只)、中劑量組(10只/20只)動物肝細胞出現(xiàn)脂肪變、嗜酸性變、疏松化變及點狀壞死，低劑量組(3只/20只)及溶媒組(2只/20只)亦分別有個別動物有類似改變但程度輕微。恢復期高劑量組(1只/10只)、中劑量組(2只/10只)、低劑量組(1只/10只)、溶媒組(1只/10只)均有個別動物肝細胞點狀或灶性壞死。本試驗給藥期及恢復期各組之間肝臟組織病理學變化比較，結合本單位大鼠長期毒性試驗相關歷史數(shù)據(jù)(蒸餾水或橄欖油

13、灌胃3 m，肝臟病理組織學基本正常或僅1～3只/20只有輕度病理改變)分析，本試驗肝臟病理改變主要由供試藥物所致；給藥期高劑量組動物腎小管上皮細胞玻璃樣變亦可能與供試藥物有關；本試驗中部分動物肺間質(zhì)及支氣管炎癥改變及胃、腸粘膜的炎細胞浸潤，不同試驗期及組間比較，病理表現(xiàn)及程度類似，結合本單位大鼠長期毒性試驗相關歷史數(shù)據(jù)(蒸餾水或橄欖油灌胃3 m，約有3～5只/20只動物出現(xiàn)肺間質(zhì)及支氣管炎癥改變及胃、腸粘膜的炎細胞浸潤)，推測非受試物因