利魯唑抑制視網(wǎng)膜新生血管形成的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：1.利用培養(yǎng)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞叢，觀察利魯唑?qū)ζ湓鲋车囊种谱饔谩?.用改良后的方法建立氧致小鼠視網(wǎng)膜新生血管形成的模型，觀察利魯唑?qū)π∈笠暰W(wǎng)膜新生血管形成的抑制作用，探討其作用機(jī)制。 方法： 1.利用MTT法檢測(cè)利魯唑?qū)EGF誘導(dǎo)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞增殖的影響。2.出生3天的清潔級(jí)C57BL/6小鼠與其哺乳母鼠(兩只以上)共同喂養(yǎng)，至出生第7天(P7)時(shí)置入自制密閉氧箱，保持箱內(nèi)的氧氣濃度為75％左右，給氧5天后回到正常環(huán)

2、境下繼續(xù)飼養(yǎng)5天，建立高氧誘導(dǎo)的血管增生性視網(wǎng)膜病變小鼠模型(OIR)，隨機(jī)分為給氧模型組和利魯唑治療組，以正常環(huán)境飼養(yǎng)的同齡小鼠作為正常對(duì)照組。治療組小鼠自出生第12天(P12)開始每天腹腔注射10mg/kg利魯唑溶液，對(duì)照組小鼠腹腔注射等量等滲的酸性生理鹽水。連續(xù)5天后(P17)取眼球做石蠟包埋切片行HE染色，計(jì)數(shù)突破視網(wǎng)膜內(nèi)界膜的內(nèi)皮細(xì)胞核數(shù)目，判斷視網(wǎng)膜新生血管的增殖程度，行免疫組化染色觀察利魯唑?qū)σ暰W(wǎng)膜組織PKC-βII及VE

3、GF表達(dá)的影響。 結(jié)果：1.一定濃度范圍的利魯唑能抑制VEGF誘導(dǎo)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞增殖。 2.HE 染色切片計(jì)數(shù)突破視網(wǎng)膜內(nèi)界膜的血管內(nèi)皮細(xì)胞核數(shù)，正常對(duì)照組平均每張切片為(0.28±0.66)個(gè)，給氧模型組平均每張切片為(31.14±10.00)個(gè)，兩者差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=21.77，P＜0.001)，表明OIR動(dòng)物模型建立成功。利魯唑治療組平均每張切片突破內(nèi)界膜的內(nèi)皮細(xì)胞核數(shù)為(6.50±3.26)個(gè)，與給氧模型組比

4、較兩者差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=16.66，P＜0.001)，表明利魯唑能有效抑制視網(wǎng)膜新生血管的發(fā)生。免疫組化染色檢測(cè)，給氧模型組小鼠視網(wǎng)膜PKC-β11、VEGF的表達(dá)比正常對(duì)照組明顯增強(qiáng)，利魯唑治療組小鼠視網(wǎng)膜PKC-β11、VEGF表達(dá)比對(duì)照組明顯減弱，表明利魯唑能有效抑制視網(wǎng)膜PKC-β11、VEGF表達(dá)。 結(jié)論：利魯唑?qū)w外培養(yǎng)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞增殖有抑制作用，腹腔注射能抑制氧致視網(wǎng)膜新生血管的形成，對(duì)視網(wǎng)膜PKC-