?；撬嵩诖笫笠暽窠?jīng)損傷再生中抗氧化、凋亡的作用研究.pdf

1、目的:視神經(jīng)損傷可導(dǎo)致視力下降甚至失明,藥物早期應(yīng)用仍是視神經(jīng)損傷的主要治療手段。牛磺酸(taurine)是一種β型的含硫氨基酸,可作為一種神經(jīng)遞質(zhì)或調(diào)節(jié)物質(zhì)在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中發(fā)揮相應(yīng)的作用,這種作用是通過(guò)防止脂質(zhì)過(guò)氧化狀態(tài)實(shí)現(xiàn)的。牛磺酸還對(duì)抗凋亡基因有一定的抵制作用,也通過(guò)抗氧化途徑保護(hù)細(xì)胞免受氧化損傷起到抗細(xì)胞凋亡的作用。視神經(jīng)是中樞神經(jīng)的一部分,?；撬犭m有多種多樣的生物學(xué)效應(yīng),并已應(yīng)用于臨床的許多方面,但在視神經(jīng)損傷的活體研究方面尚

2、未見(jiàn)報(bào)道。本研究通過(guò)制作大鼠視神經(jīng)不完全損傷動(dòng)物模型,腹腔注射?；撬?觀察視網(wǎng)膜形態(tài)學(xué)改變及視神經(jīng)組織中一氧化氮合酶(iNOS)的變化并測(cè)定視神經(jīng)組織中超氧化物岐化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量,探討?；撬釋?duì)視神經(jīng)損傷后再生修復(fù)的作用,為?；撬嶂委熞暽窠?jīng)損傷提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)及理論基礎(chǔ)。
　　 方法:雌性清潔級(jí)SD大鼠84只,體重250g±10g,行外眼及眼底檢查無(wú)病變者納入實(shí)驗(yàn)。按隨機(jī)對(duì)照表分組,正常組(12只)、對(duì)照組(2

3、4只)、治療組(24只)、預(yù)處理組(24只)。對(duì)照組、治療組和預(yù)處理組共72只大鼠右眼均制作成視神經(jīng)不完全損傷模型,左眼不做處理;正常組不做任何處理。對(duì)照組大鼠從致傷后1小時(shí)給予蒸餾水(按250mg/kg劑量)腹腔注射,每日一次,直至實(shí)驗(yàn)結(jié)束;治療組大鼠從致傷后1小時(shí)給予?；撬??；撬岱蹌┯谜麴s水配成5％的濃度,200目濾過(guò)膜過(guò)濾除菌后備用,按250mg/kg劑量)腹腔注射,每日一次,直至實(shí)驗(yàn)結(jié)束;預(yù)處理組大鼠從致傷前3天給予?；撬?濃

4、度、劑量同治療組)腹腔注射,每日一次,直至實(shí)驗(yàn)結(jié)束。按傷后3天、7天、14天、28天四個(gè)時(shí)間點(diǎn)隨機(jī)將正常組3只雙眼眼球、其余各組6只大鼠右眼球摘除,取視神經(jīng)及視網(wǎng)膜組織。采用HE染色、光學(xué)顯微鏡觀察視網(wǎng)膜形態(tài)學(xué)改變,免疫組織化學(xué)方法觀察視神經(jīng)組織中iNOS陽(yáng)性細(xì)胞灰度值的表達(dá),黃嘌呤氧化酶法測(cè)定視神經(jīng)組織中SOD的活性,改良硫代巴比妥酸(TBA)熒光法測(cè)定視神經(jīng)組織中MDA的含量。本實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用(-x)±s表示,采用方差分析、SPSS13

5、.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　 結(jié)果:
　　 1視網(wǎng)膜組織HE染色正常組視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層、內(nèi)核層及感光細(xì)胞層各層結(jié)構(gòu)清晰可見(jiàn);對(duì)照組各時(shí)間點(diǎn)視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞(retinal ganglioncells,RGCs)排列紊亂,可見(jiàn)空泡化的RGCs,內(nèi)核層和感光細(xì)胞不同程度的減少;治療組也可見(jiàn)上述改變,但治療組各時(shí)間點(diǎn)均較對(duì)照組各時(shí)間點(diǎn)損傷情況輕;預(yù)處理組各時(shí)間點(diǎn)視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞損傷情況,與治療組之間差別不明顯。
　

6、　 2正常組僅可見(jiàn)極少量iNOS陽(yáng)性細(xì)胞,實(shí)驗(yàn)3天、7天、14天、28天無(wú)明顯改變,表達(dá)都處于較低水平,而灰度值較高。對(duì)照組3天時(shí)iNOS陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量增加,灰度值下降,7天時(shí)下降達(dá)高峰,14天時(shí)出現(xiàn)上升趨勢(shì),28天時(shí)繼續(xù)上升。治療組iNOS陽(yáng)性細(xì)胞灰度值高峰不明顯,3天時(shí)下降,持續(xù)至7天,14天時(shí)下降達(dá)高峰,直至28天時(shí)。預(yù)處理組iNOS陽(yáng)性細(xì)胞灰度值,3天時(shí)開(kāi)始下降,7天到14天時(shí)下降較緩慢,14天到28天時(shí)下降較明顯。視神經(jīng)組織中

7、iNOS陽(yáng)性細(xì)胞灰度值測(cè)定在實(shí)驗(yàn)的3天、7天、14天及28天時(shí)對(duì)照組及預(yù)處理組視神經(jīng)組織iNOS陽(yáng)性細(xì)胞灰度值明顯低于同期正常組(P＜0.01),具有非常顯著性差異;各時(shí)間點(diǎn)治療組視神經(jīng)組織iNOS陽(yáng)性細(xì)胞灰度值高于同期正常組(14天時(shí)P＜0.05,3天、7天及28天P＜0.01),具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;各時(shí)間點(diǎn)治療組、預(yù)處理組明顯高于同期對(duì)照組(P＜0.01),具有非常顯著性差異;3天時(shí)治療組視神經(jīng)組織iNOS陽(yáng)性細(xì)胞灰度值高于同期預(yù)處理組

8、(P＜0.05),差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;7天、14天、28天時(shí)治療組視神經(jīng)組織iNOS陽(yáng)性細(xì)胞灰度值與同期預(yù)處理組無(wú)明顯差別(P＞0.05)。
　　 3正常組視神經(jīng)組織中SOD活性在實(shí)驗(yàn)3天、7天、14天、28天無(wú)明顯改變,表達(dá)都處于較高水平。對(duì)照組3天時(shí)視神經(jīng)組織中SOD活性下降,7天、14天時(shí)視神經(jīng)組織中SOD活性明顯下降,28天時(shí)繼續(xù)下降。治療組3天時(shí)視神經(jīng)組織中SOD活性下降,7天時(shí)下降不明顯,直至28天時(shí)。預(yù)處理組3天時(shí)視

9、神經(jīng)組織中SOD活性下降不明顯,7天時(shí)下降,直至28天時(shí)。視神經(jīng)組織中SOD活性測(cè)定在實(shí)驗(yàn)的3天、7天、14天、28天時(shí)對(duì)照組、治療組視神經(jīng)中SOD活性表達(dá)明顯低于同期正常組(P＜0.01),具有非常顯著性差異;各時(shí)間點(diǎn)預(yù)處理組視神經(jīng)中SOD活性表達(dá)低于同期正常組(3天時(shí)P＜0.05,7天、14天、28天時(shí)P＜0.01),均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;各時(shí)間點(diǎn)治療組、預(yù)處理組視神經(jīng)中SOD活性明顯高于同期對(duì)照組(P＜0.01),具有非常顯著性差異;

10、3天時(shí)治療組視神經(jīng)組織中SOD活性表達(dá)低于同期預(yù)處理組(P＜0.05),具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;7天、14天、28天時(shí)治療組視神經(jīng)組織中SOD活性表達(dá)與同期預(yù)處理組無(wú)明顯差別(P＞0.05)。
　　 4正常組視神經(jīng)組織中MDA的含量在實(shí)驗(yàn)3天、7天、14天、28天無(wú)明顯改變,表達(dá)都處于較低水平。對(duì)照組3天時(shí)視神經(jīng)中MDA的含量升高,7天、14天時(shí)視神經(jīng)組織中MDA的含量升高較明顯,28天時(shí)繼續(xù)升高。治療組3天時(shí)視神經(jīng)組織中MDA的含量升

11、高,7天時(shí)升高明顯,以后升高緩慢,直至28天時(shí)。預(yù)處理組3天時(shí)視神經(jīng)組織中MDA的含量升高不明顯,7天時(shí)升高,直至28天時(shí)。視神經(jīng)組織中MDA含量測(cè)定在實(shí)驗(yàn)的3天、7天、14天、28天時(shí)對(duì)照組、治療組視神經(jīng)組織中MDA含量明顯高于同期正常組(P＜0.01),具有非常顯著性差異;各時(shí)間點(diǎn)預(yù)處理組視神經(jīng)組織中MDA含量表達(dá)高于同期正常組(3天時(shí)P＜0.05,7天、14天、28天時(shí)P＜0.01),具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;各時(shí)間點(diǎn)治療組、預(yù)處理組視神經(jīng)

12、組織中MDA含量明顯低于同期對(duì)照組,具有非常顯著性差異(P＜0.01);3天時(shí)治療組視神經(jīng)組織中MDA含量表達(dá)高于同期預(yù)處理組(P＜0.05),具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;7天、14天、28天時(shí)治療組視神經(jīng)組織中MDA含量表達(dá)與同期預(yù)處理組無(wú)明顯差別(P＞0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1外傷性視神經(jīng)損傷后RGCs排列紊亂,細(xì)胞數(shù)量減少;視神經(jīng)纖維排列紊亂。
　　 2牛磺酸能降低外傷性視神經(jīng)損傷后視神經(jīng)組織中一氧化氮合酶(