車(chē)前子多糖對(duì)糖尿病小鼠自由基防御功能的影響.pdf

1、本論文分兩部分:車(chē)前子多糖的提取,車(chē)前子多糖對(duì)糖尿病小鼠自由基防御功能的影響。第一部分:采用微波提取和傳統(tǒng)醇沉等工藝相結(jié)合的方法,提取得到的車(chē)前子多糖產(chǎn)率高、重復(fù)性和穩(wěn)定性好。第二部分:通過(guò)觀察車(chē)前子多糖對(duì)糖尿病小鼠模型的影響,探討車(chē)前子多糖的抗氧化能力及可能機(jī)制。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,車(chē)前子多糖具有一定的抗氧化及清除自由基的作用。
　　 第一部分車(chē)前子多糖的提取
　　 目的:建立提取車(chē)前子多糖的方法,為下一步進(jìn)行車(chē)前子多糖的研

2、究提供原料。
　　 方法:精確稱(chēng)取已干燥的車(chē)前子5g,加入75ml蒸餾水,在微波強(qiáng)度為60％的微波爐中微波輻射提取65秒;取出后用絹布過(guò)濾,濾渣用熱蒸餾水洗滌,合并濾液,離心(4000r·min-1,10分鐘)分離;將上清液在旋蒸儀上進(jìn)行旋蒸濃縮;上清液濃縮至1:20,在不斷攪拌下緩緩加入2倍量無(wú)水乙醇,低溫(4℃)靜置12小時(shí);將醇沉液離心(4000r·min1-,10分鐘)分離,沉淀再用無(wú)水乙醇攪拌后浸泡1小時(shí),離心后的沉淀

3、物依次用無(wú)水乙醇、丙酮、乙醚各攪拌洗滌兩次,于60℃烘箱中烘干至恒重,即得精制車(chē)前子多糖。稱(chēng)重,計(jì)算產(chǎn)率,備用。
　　 結(jié)果:采取該方法,提取得到的車(chē)前子多糖產(chǎn)率為6.47％;將干燥的多糖溶于水,測(cè)得換算因子f=1.998;其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為1.49和2.66;加樣回收率為98.24％。
　　 結(jié)論:實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,用微波提取和傳統(tǒng)水提、醇沉、分離相結(jié)合的方法提取車(chē)前子多糖,具有工藝簡(jiǎn)單方便,產(chǎn)率高,重復(fù)性和穩(wěn)定性好的優(yōu)

4、點(diǎn),適合在實(shí)驗(yàn)室制備車(chē)前子多糖。
　　 第二部分車(chē)前子多糖對(duì)糖尿病小鼠自由基防御功能的影響
　　 目的:觀察車(chē)前子多糖對(duì)四氧嘧啶誘發(fā)糖尿病小鼠氧自由基損傷的保護(hù)作用。
　　 方法:
　　 1實(shí)驗(yàn)分組
　　 本實(shí)驗(yàn)采用昆明小鼠,隨機(jī)分為5組(n=8):正常對(duì)照組(Control),糖尿病模型組(Model),不同劑量實(shí)驗(yàn)組,分別為(Model+P1);(Model+P2)和(Model+P3),糖尿

5、病模型組為四氧嘧啶誘發(fā)的小鼠糖尿病模型。實(shí)驗(yàn)組分別在模型組中每天灌服不同劑量的車(chē)前子多糖,1組灌服PSP100mg·kg-1每天1次;2組灌服PSP200mg·kg-1每天1次:3組灌服PSP400mg·kg-1每天1次。所有小鼠置代謝籠中飼養(yǎng)20天。
　　 2指標(biāo)檢測(cè)
　　 為了評(píng)價(jià)車(chē)前子多糖(PSP)自由基防御作用。采用四氧嘧啶誘導(dǎo)劑,建立小鼠糖尿病模型。小鼠眼眶取血,以3500r·min-1離心10分鐘,取血清測(cè)定

6、有關(guān)指標(biāo)。小鼠斷頭處死,迅速取心及腎組織,用生理鹽水洗凈,濾紙吸干,稱(chēng)重,以0.05mol/L磷酸緩沖液制成20％組織勻漿,-20℃保存?zhèn)溆?。比色法測(cè)定超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、過(guò)氧化氫酶(CAT)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-PX)、一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)活性,觀察車(chē)前子多糖對(duì)各項(xiàng)生化指標(biāo)的影響。
　　 結(jié)果:
　　 1小鼠糖尿病模型的確定
　　 根據(jù)一次性腹腔注射四氧嘧啶(

7、150 mg.kg-1),觀察測(cè)定72小時(shí)后的空腹血糖水平,血糖值超過(guò)200 mg·dl-1的小鼠確定為糖尿病模型。
　　 2對(duì)小鼠血清、心臟MDA含量的影響
　　 血清、心臟Model組MDA含量分別為:血清(10.29±1.12)nmol·mg-1·ml-1,心臟(2.96±0.27)nmol·mg-1·pro-1。不同濃度的PSP(100～400mg·kg-1)分別與Model組對(duì)比,MDA的含量明顯減少,其中血清

8、(Model+P1)組為(9.01±0.91)nmol·mg-1·ml-1,與相對(duì)應(yīng)Model組相比有差異(P＜0.05);(Model+P2)組為(8.93±0.72)nmol·mg-1·ml-1,(Model+P3)組為(8.30±0.94)nmol·mg-1·pro-1,與相對(duì)應(yīng)Model組相比有差異(P＜0.01)。心臟各組分別為(1.43±0.41)nmol·mg-1·pro-1,(1.26±0.11)nmol·mg-1·pr

9、o-1,(1.23±0.17)nmol·mg-1·pro-1,與相對(duì)應(yīng)Model組相比有差異(P＜0.01)。兩者皆存在劑量依賴性(P＜0.05),表明PSP具有自由基防御功能。
　　 3對(duì)小鼠血清、心臟SOD活力的影響
　　 血清、心臟Model組SOD活力分別為:血清(237.21±13.83)U·ml-1,心臟(73.88±10.25)U·mg-1·pro-1。不同濃度的PSP(100～400mg·kg-1)分別與

10、Model組對(duì)比,SOD的活力增強(qiáng),其中血清(Model+P1)組為(246.57±10.81)U·ml-1,心臟(Model+P1)組為(80.25±8.88)U·mg-1·pro-1,相對(duì)各自Model組SOD活力都略有增強(qiáng),但均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。血清(Model+P2)組為(258.80±11.19)U·ml-1,(Model+P3)組為(277.92±8.70)U·ml-1,與相對(duì)應(yīng)Model組對(duì)比有顯著差異(P＜0.01);心臟(

11、Model+P2)組為(91.88±15.92)U·mg-1·pro-1,與Model組相比有差異(P＜0.05);(Model+P3)組為(111.90±10.79)U·mg-1·pro-1,與Model組相比有顯著差異(P＜0.01)。可以發(fā)現(xiàn)SOD活力與PSP之間存在劑量依賴性(P＜0.05),表明PSP具有自由基防御作用。
　　 4對(duì)小鼠血清、心臟SOD/MDA比值的影響
　　 與Control組比較,Model

12、組脂質(zhì)過(guò)氧化代謝產(chǎn)物MDA含量增加,而SOD/MDA比值下降,SOD/MDA是反映機(jī)體自由基代謝的一個(gè)重要指標(biāo),其比值下降表明機(jī)體清除自由基能力降低和脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)增強(qiáng)。不同濃度的PSP(100～400mg·kg-1)對(duì)SOD活性具有激活作用,使SOD/MDA明顯增強(qiáng)(P＜0.01)。結(jié)果表明PSP對(duì)四氧嘧啶激發(fā)的糖尿病造成的SOD的降低可以糾正。
　　 結(jié)論:車(chē)前子多糖能夠降低四氧嘧啶誘發(fā)的小鼠糖尿病模型的MDA含量,提高NO