西農(nóng)薩能奶山羊和波爾山羊部分經(jīng)濟(jì)性狀的PCR-SSCP標(biāo)記研究.pdf

1、本研究以西農(nóng)薩能奶山羊和波爾山羊2個(gè)品種共計(jì)260個(gè)個(gè)體為材料，利用生物信息學(xué)、DNA測(cè)序、DNA序列分析、PCR-SSCP技術(shù)研究了山羊PRLR基因(intronl、2,exon10)、PRL，基因(5'端)、GHR基因(exon9、10)以及LHβ基因(5'端、exon2、exon3)共4個(gè)候選基因16個(gè)位點(diǎn)遺傳變異，同時(shí)探討山羊群體遺傳多態(tài)性及其與經(jīng)濟(jì)性狀(產(chǎn)奶量、產(chǎn)羔數(shù))的關(guān)系，旨在獲取相應(yīng)的分子遺傳學(xué)信息，找到與經(jīng)濟(jì)性狀相關(guān)的

2、DNA標(biāo)記，為山羊遺傳資源保護(hù)、開(kāi)發(fā)與利用提供科學(xué)依據(jù)。本研究獲得以下重要結(jié)果： 1.山羊PRLR基因遺傳變異位點(diǎn)與經(jīng)濟(jì)性狀的關(guān)系 1.1 PRLR基因內(nèi)含子Ⅰ和Ⅱ位點(diǎn)與經(jīng)濟(jì)性狀的關(guān)系 針對(duì)PRLR基因內(nèi)含子Ⅰ和Ⅱ設(shè)計(jì)的2對(duì)引物中，引物P1不存在多態(tài)，3處突變導(dǎo)致引物P2位點(diǎn)多態(tài)，共發(fā)現(xiàn)GG、GH、HH 3種基因型，2個(gè)山羊群體都以GG型為主；其基因型和等位基因分布與西農(nóng)薩能奶山羊的產(chǎn)奶量和產(chǎn)羔數(shù)之間不存在顯著相

3、關(guān)(P>0.05)；該位點(diǎn)與波爾山羊產(chǎn)羔數(shù)之間存在顯著相關(guān)(P<0.01)，如引物P2位點(diǎn)多態(tài)的GH基因型在第5胎產(chǎn)羔數(shù)極顯著高于GG型個(gè)體(P<0.01)，第3胎也顯著高于GG型(P<0.05)。 1.2 PRLR基因外顯子lO位點(diǎn)與經(jīng)濟(jì)性狀的關(guān)系 在針對(duì)PRLR基因外顯子10設(shè)計(jì)的4對(duì)引物的PCR-SSCP分析中，發(fā)現(xiàn)僅引物P3不存在多態(tài)性，引物P4、P5與P6擴(kuò)增片段具有多態(tài)性。應(yīng)用P4擴(kuò)增片段，在2個(gè)品種中僅檢測(cè)

4、到AA型和AB型，純化測(cè)序表明AA型與AB型相比有2處突變，27C→T的突變沒(méi)有導(dǎo)致氨基酸變化，第189處的堿基缺失導(dǎo)致氨基酸由組氨酸變?yōu)槔野彼岷吞K氨酸。AA和AB基因型之間產(chǎn)奶量的最小二乘均值差異顯著(P<0.05)，AA基因型在各胎次產(chǎn)奶量和平均產(chǎn)奶量等指標(biāo)上均高于AB基因型，其中第三胎的產(chǎn)奶量達(dá)到顯著水平(P<0.05)；應(yīng)用P5擴(kuò)增片段，只檢測(cè)到三種基因型(CC、CD、DD)，純化測(cè)序表明CC型與DD型相比有2處突變(103C→

5、A和106T→C)，分別導(dǎo)致氨基酸由賴氨酸變?yōu)樘K氨酸、蘇氨酸變?yōu)楫惲涟彼?；三種基因型之間產(chǎn)奶量的最小二乘均值差異不顯著(P>0.05)。在兩個(gè)品種中，引物P5的多態(tài)都與產(chǎn)羔數(shù)相關(guān)。如：波爾山羊P5位點(diǎn)的各基因型與產(chǎn)羔數(shù)間存在顯著相關(guān)，在第三胎產(chǎn)羔數(shù)指標(biāo)上，CC基因型個(gè)體產(chǎn)羔數(shù)顯著多于DD型(P<0.05)。應(yīng)用P6擴(kuò)增片段，在2個(gè)品種中也只檢測(cè)到EE型和EF型，純化測(cè)序表明EE型與EF型相比有1處突變(114A→G)，該突變導(dǎo)致氨基酸有

6、蛋氨酸變?yōu)槔i氨酸；EE和EF基因型之間產(chǎn)奶量差異顯著(P<0.05)。EE基因型的個(gè)體各胎次產(chǎn)奶量均比EF型高，其中在第3、4胎產(chǎn)奶量和前四胎平均產(chǎn)奶量3項(xiàng)指標(biāo)上都達(dá)到顯著水平(P<0.05)。 2.山羊GHR基因遺傳變異位點(diǎn)與經(jīng)濟(jì)性狀的關(guān)系 在山羊GHR基因Exon9和Exon10位點(diǎn)中，僅發(fā)現(xiàn)Exon9存在1處突變位點(diǎn)：241G→T，在兩個(gè)群體中只發(fā)現(xiàn)兩個(gè)基因型(NN,NT)，該位點(diǎn)仍在兩個(gè)山羊中均為低度多態(tài)(PIC

7、<0.25)。 Exon9擴(kuò)增位點(diǎn)對(duì)產(chǎn)奶量有顯著影響：NN基因型在各胎次產(chǎn)奶量和平均產(chǎn)奶量等指標(biāo)上均好于NT基因型，其中在第三胎的產(chǎn)奶量和第四胎產(chǎn)奶量2項(xiàng)指標(biāo)上都達(dá)到顯著水平(P<0.05)。 在西農(nóng)薩能山羊品種上，GHR基因座位的不同基因型與各胎次產(chǎn)羔數(shù)及平均產(chǎn)羔數(shù)等指標(biāo)均無(wú)相關(guān)性(P>0.05)。在波爾山羊中，GHR基因NN基因型在各胎次產(chǎn)羔數(shù)上均好于NT基因型，且在第四胎產(chǎn)羔數(shù)上NN型個(gè)體優(yōu)于NT型個(gè)體(P<0.0

8、5)。 3.山羊LHB基因遺傳變異位點(diǎn)與產(chǎn)羔數(shù)的關(guān)系 應(yīng)用PCR.SSCP技術(shù)對(duì)兩個(gè)山羊品種進(jìn)行LHp基因多態(tài)性分析，在設(shè)計(jì)的6對(duì)引物中，山羊LHB基因P1與P5(exon2)存在153C→A和64T→C突變位點(diǎn)，它們與山羊的產(chǎn)羔數(shù)之間存在顯著相關(guān)，P1引物位點(diǎn)多態(tài)與波爾山羊第3胎產(chǎn)羔數(shù)和第4胎產(chǎn)羔數(shù)顯著相關(guān)：PP型個(gè)體第3胎和第4胎產(chǎn)羔數(shù)均極顯著高于PQ型個(gè)體(P<0.01)；此位點(diǎn)多態(tài)在西農(nóng)薩能奶山羊第4胎和第5胎產(chǎn)