冷凍、獲能及鴿蛋LDL對豬精子細(xì)胞骨架完整性的影響.pdf

1、本試驗(yàn)的主要目的是探索低溫和獲能對豬精子細(xì)胞骨架中兩種主要成分微管蛋白和肌動蛋白含量的影響，從分子生物學(xué)角度探究豬精子低溫冷凍保存后活率低下的原因，并利用鴿蛋中提取的低密度脂蛋白（LDL）代替?zhèn)鹘y(tǒng)的雞卵黃作為冷凍保護(hù)劑，研究其對豬精子細(xì)胞骨架完整性的保護(hù)作用。本試驗(yàn)主要采用SDS-PAGE和Western Blot等試驗(yàn)方法對低溫和獲能等不同處理的精子蛋白質(zhì)樣品進(jìn)行分析，得到以下結(jié)果：
　　1.本試驗(yàn)采用CM獲能液在恒溫培養(yǎng)箱中以

2、38℃，5％CO2條件下孵育四小時(shí)。對其蛋白質(zhì)樣品進(jìn)行蛋白質(zhì)免疫印跡分析。結(jié)果表明豬精子獲能后微管蛋白的含量幾乎沒有發(fā)生變化，而肌動蛋白的含量略有下降。
　　2.對新鮮精子、獲能精子、低溫處理精子的蛋白進(jìn)行 SDS-PAGE，試驗(yàn)結(jié)果顯示，低溫保存后豬精子蛋白的種類和一些蛋白質(zhì)的含量發(fā)生了變化，而獲能后精子樣本與鮮精樣本基本沒有差異。
　　3.將豬精子在不同溫度（-80℃和-196℃）下進(jìn)行冷凍24小時(shí)后對其蛋白質(zhì)樣本進(jìn)行S

3、DS-PAGE和Western Blot分析。試驗(yàn)結(jié)果表明：凍融后豬精子微管蛋白略有下降，而肌動蛋白的下降量十分顯著；-196℃的冷凍效果略好于-80℃。
　　4.用鴿蛋中提取的LDL代替?zhèn)鹘y(tǒng)的雞卵黃作為冷凍保護(hù)劑，不同溫度（-80℃和-196℃）下進(jìn)行冷凍保存。將凍融后的精子樣本進(jìn)行Western Blot分析。結(jié)果
　　表明：無論是-80℃還是-196℃，添加LDL后微管蛋白和肌動蛋白的含量均更接近鮮精樣本，且兩組間明顯