北美喬松胚性組織成熟胚形成潛力差異的生化基礎(chǔ)研究.pdf

1、本文通過(guò)對(duì)北美喬松(Pinus strobus)具有成胚潛力差異的兩細(xì)胞系(細(xì)胞系01具有成胚潛力，細(xì)胞系02不具有成胚潛力) 增殖階段胚性愈傷組織（ET）細(xì)胞形態(tài)及結(jié)構(gòu)差異比較，對(duì)比分析增殖階段ET生長(zhǎng)、蔗糖代謝及蛋白表達(dá)情況，探討成熟胚誘導(dǎo)能力差異的形態(tài)學(xué)、細(xì)胞學(xué)和分子生物學(xué)基礎(chǔ)，結(jié)果表明： 1、兩細(xì)胞系ET在增殖培養(yǎng)階段形態(tài)差異不明顯，在ET結(jié)構(gòu)上有差異：01細(xì)胞系中存在一種02細(xì)胞系缺乏的結(jié)構(gòu)類型ESM4。 2、

2、02細(xì)胞系相對(duì)生長(zhǎng)率RGR在整個(gè)增殖階段均高于01細(xì)胞系，RGR最大值出現(xiàn)在4-5天；但01細(xì)胞系RGR最大值在第3天，比02細(xì)胞系略有提前，且在15d時(shí)很低，20d時(shí)接近于0。 3、兩細(xì)胞系增殖階段ET己糖、己糖/蔗糖比值、轉(zhuǎn)化酶活性和RGR之間呈正相關(guān)。 4、采用Bradford法測(cè)定可溶性蛋白總量：01細(xì)胞系ET可溶性蛋白總量高于02細(xì)胞系。 5、SDS-PAGE圖譜顯示：兩細(xì)胞系ET中均存在分子量大小約為

3、88.8KD，64.2 KD，53.8KD，36.5KD，33.9KD，18.6KD六種蛋白。其中，18.6KD蛋白的表達(dá)量01細(xì)胞系強(qiáng)于02細(xì)胞系，36.5KD蛋白表達(dá)量01細(xì)胞系弱于02細(xì)胞系；02細(xì)胞系中存在71.6KD和24.0KD兩種特異蛋白。 本項(xiàng)研究首次較系統(tǒng)地報(bào)道了北美喬松由增殖到成熟胚誘導(dǎo)階段的細(xì)胞顯微結(jié)構(gòu)，確定了顯微結(jié)構(gòu)觀測(cè)可以作為胚性愈傷組織誘導(dǎo)成熟胚潛力的初步診斷方法。 通過(guò)北美喬松胚性愈傷組織R