Apelin-13促肺腺癌A549細(xì)胞增殖、自噬及凋亡研究.pdf

1、目的:本課題探討G蛋白偶聯(lián)受體APJ及其內(nèi)源性配體apelin是否影響肺腺癌A549細(xì)胞的增殖、自噬、凋亡及其ERK1/2信號通路，發(fā)現(xiàn)apelin/APJ系統(tǒng)的新生物學(xué)功能。
　　方法:
　　1.細(xì)胞增殖檢測法：CCK-8試劑盒檢測apelin-13對肺腺癌細(xì)胞系A(chǔ)549增殖的影響；
　　2.流式細(xì)胞術(shù)：檢測細(xì)胞周期分布、細(xì)胞凋亡情況；
　　3.Hoechst33258染色：觀察細(xì)胞凋亡情況；
　　4.W

2、estern Blot：檢測蛋白分子pERK1/2、ERK1/2、CyclinD1、LC3A/B、beclin1以及Caspase-3的表達(dá)；
　　5.原子力顯微鏡（AFM）：掃描細(xì)胞表面形貌。
　　結(jié)果:
　　1.CCK-8試劑盒細(xì)胞增殖檢測顯示，apelin-13促進(jìn)肺腺癌A549細(xì)胞增殖，呈時間（0-48h）、濃度（0.0001-1μmol/L）依賴關(guān)系，其中濃度為0.1μmol/L、時間為24h時增殖最明顯，E

3、RK1/2抑制劑PD98059顯著減弱apelin-13促細(xì)胞增殖作用，抑制自噬及誘導(dǎo)自噬后對apelin-13誘導(dǎo)的A549細(xì)胞增殖沒有明顯影響，而分別采用自噬抑制劑3-MA及誘導(dǎo)劑RAPA單獨(dú)預(yù)處理A549細(xì)胞，細(xì)胞均明顯增殖;
　　2.流式細(xì)胞術(shù)檢測發(fā)現(xiàn)，apelin-13（0.1μmol/L）增加肺腺癌A549細(xì)胞S期百分比，加快G1/S期轉(zhuǎn)化；apelin-13（0.1μmol/L）增加細(xì)胞凋亡百分率，ERK1/2抑制劑

4、PD98059沒有抑制apelin-13誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡;
　　3.Hoechst33258染色檢測細(xì)胞凋亡，結(jié)果顯示apelin-13（0.1μmol/L）可誘導(dǎo)A549細(xì)胞凋亡;
　　4.Western Blot檢測結(jié)果顯示，與Control組比較，0.1μmol/L apelin-13單獨(dú)作用A549細(xì)胞能促進(jìn)ERK1/2磷酸化水平增加，對ERK1/2表達(dá)無影響；與Control組比較，0.1μmol/L apelin-

5、13單獨(dú)作用24h后，肺腺癌A549細(xì)胞CyclinD1表達(dá)增加，細(xì)胞自噬標(biāo)志蛋白LC3A/B及Beclin1表達(dá)增加，Caspase-3表達(dá)增加；ERK1/2抑制劑PD98059（10μmol/L）抑制apelin-13引起的ERK1/2磷酸化增強(qiáng)，抑制apelin-13誘導(dǎo)的CyclinD1、LC3A/B及Beclin1表達(dá)增加，對Caspase-3表達(dá)無明顯抑制作用。
　　5.AFM掃描結(jié)果顯示，細(xì)胞表面有孔洞結(jié)構(gòu)，apel