山莨菪堿和新斯的明聯(lián)合治療小鼠類風濕性關(guān)節(jié)炎的作用研究.pdf

1、研究目的:
　　 類風濕關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis，RA)是一種多關(guān)節(jié)慢性炎癥為主要表現(xiàn)的自身免疫性疾病，有關(guān)節(jié)外組織器官受累，可致殘。傳統(tǒng)的治療RA的方法，主要是采用非甾體類抗炎藥物、糖皮質(zhì)激素以及能夠改善病情的抗風濕類藥物。RA患者的關(guān)節(jié)滑膜液和血液中有多種細胞因子存在，而致炎細胞因子在RA滑膜成纖維細胞侵襲性生長方面充當了至關(guān)重要的角色。
　　 近年來研究發(fā)現(xiàn)神經(jīng)系統(tǒng)主要通過迷走神經(jīng)反射參與炎

2、癥調(diào)控，在限制炎癥應答的過程中發(fā)揮著重要的角色，被稱作“膽堿能抗炎通路”。迷走神經(jīng)的主要神經(jīng)遞質(zhì)乙酰膽堿，是膽堿能抗炎通路的關(guān)鍵性介質(zhì)。神經(jīng)遞質(zhì)主要與尼古丁乙酰膽堿受體(nAChR)家族作用，尤其是巨噬細胞上的α7亞型(α7nAChR)。山莨菪堿通過阻斷M膽堿受體，使體內(nèi)更多的乙酰膽堿作用于巨噬細胞α7尼古丁受體，加強了乙酰膽堿對巨噬細胞α7尼古丁受體的激活作用，從而激活了膽堿能抗炎通路，達到治療RA的作用。
　　 鑒于臨床上單

3、獨使用山莨菪堿存在用藥劑量大，容易產(chǎn)生阿托品樣副作用的缺點，而且臨床上單獨使用膽堿脂酶抑制劑治療容易引起乙酰膽堿蓄積導致心血管系統(tǒng)和消化系統(tǒng)的副作用。在此，我們首次提出將毒蕈堿受體阻斷劑和膽堿脂酶抑制劑這兩類藥物以適當?shù)谋壤?lián)合使用（即復方山莨菪堿）的治療方案來協(xié)同激活膽堿能抗炎通路，增強其抗炎效果并降低其副作用。為臨床治療RA提供新的治療策略。而且，我們課題組之前的研究工作表明復方山莨菪堿即山莨菪堿和新斯的明聯(lián)合治療可以激活α7nAC

4、hR，已申請專利。因此，本課題對此復方治療RA進行實驗性研究和探索。
　　 研究方法:
　　 以膠原蛋白誘導的類風濕性關(guān)節(jié)炎模型在RA的研究過程中是較常見的，所以本研究首先以膠原蛋白誘導的關(guān)節(jié)炎DBA/1J小鼠為模型。利用整體動物實驗方法研究山莨菪堿(25mg/kg，i.p)及新斯的明(50μg/kg，i.p)復方對小鼠關(guān)節(jié)炎的治療作用，使用關(guān)節(jié)炎指數(shù)及足趾腫脹程度評估關(guān)節(jié)炎嚴重程度，影像學及組織學評分判斷復方對其治療的

5、影響。并采用ELISA方法檢測復方對血清炎癥細胞因子(TNFα，IL-6，IL-1β)的表達，及Ⅱ型膠原蛋白特異性抗體(IgG, IgG1，IgG2a)的表達影響。
　　 結(jié)果:
　　 1.用膠原蛋白誘導的關(guān)節(jié)炎模型(CIA)，用復方治療組小鼠關(guān)節(jié)炎程度明顯減輕。關(guān)節(jié)炎評分治療組小鼠明顯低于對照組，通過治療，治療組小鼠的體重也高于對照組;
　　 2.影像學X光的結(jié)果表明治療組與對照組相比骨質(zhì)流失明顯減少。Micr

6、o-CT的結(jié)果則表明用復方治療后關(guān)節(jié)炎小鼠的骨侵蝕明顯輕于對照組;
　　 3.組織學切片HE染色的結(jié)果顯示治療組小鼠的關(guān)節(jié)形態(tài)比較完整并且滑膜侵蝕程度也明顯輕于對照組;
　　 4.血清中炎癥因子的ELISA結(jié)果顯示，用復方治療后，血清中炎癥因子(TNFα，IL-6，IL-1β)明顯減少;
　　 5.血清中類風濕病的特定指標Ⅱ型膠原蛋白特異性抗體(IgG, IgG2a)在復方治療后，治療組比對照組明顯較少。