StH-PDE對玉米大斑病菌生長發(fā)育的影響及StPKA-C靶蛋白的篩選.pdf

1、玉米大斑病菌是一種重要的絲狀病原真菌，目前對病菌生物學、生理分化、遺傳變異、致病性、發(fā)育調控等研究較為深入。研究表明，由異源三聚體G蛋白介導的cAMP信號轉導途徑對植物病原真菌的生長發(fā)育及致病性有重要的調控作用。其中磷酸二酯酶通過調節(jié)細胞cAMP水平，既可以調控病菌的生長發(fā)育，同時又對病菌的細胞形態(tài)建成具有重要調控作用。本課題組已獲得2個編碼磷酸二酯酶基因StH-PDE和StL-PDE的缺失突變體，其中StH-PDE基因缺失突變體表現為

2、無分生孢子產生、細胞壁完整性缺陷及黑色素含量下降。為進一步證實StH-PDE基因在上述方面的作用，我們構建了StH-PDE的回復載體，通過PEG介導的原生質體轉化技術獲得了StH-PDE回復突變體。該回復突變體的菌落形態(tài)、顏色，細胞壁完整性缺陷及黑色素含量均回復到WT菌株水平，但分生孢子產量遠未回復到WT菌株水平。
　　對StH-PDE敲除突變體及野生型菌株進行轉錄組測序分析，尋找可能受到StH-PDE基因敲除影響并且與病菌絲狀生

3、長、細胞壁完整性等相關的功能基因。此外，蛋白激酶A作為cAMP下游的靶蛋白，通過磷酸化下游靶標蛋白發(fā)揮調控絲狀真菌的形態(tài)建成及致病性的作用。本研究利用酵母雙雜交技術對蛋白激酶A催化亞基與候選蛋白的互作關系進行體內驗證，并通過構建原核表達載體對StPKA-C2進行原核表達及蛋白純化，為進一步體外獲得下游靶標蛋白奠定基礎。主要結果如下:
　　1.玉米大斑病菌StH-PDE基因調控分生孢子產生，但對病菌生長無明顯影響。
　　2.S

4、tH-PDE正調控大斑病菌黑色素生物合成?；蚯贸购谏睾铣上嚓P基因表達水平明顯下降，胞內黑色素含量下降，菌落顏色明顯變淺。
　　3.StH-PDE正調控病菌細胞壁完整性。基因缺失導致8個幾丁質合成酶基因中的7個基因表達明顯下調，細胞壁幾丁質含量明顯降低。
　　4.對野生型(WT)、△StH-PDE菌株進行轉錄組測序分析，△StH-PDE基因缺失突變體與WT相比，轉錄水平發(fā)生明顯變化，發(fā)現差異基因1620個，上調889個，