幾種免疫促進(jìn)劑對(duì)菲律賓蛤仔（Ruditapes philippinarum）酚氧化酶的產(chǎn)量和活性以及血細(xì)胞的數(shù)量和超微結(jié)構(gòu)的影響.pdf

1、許多免疫促進(jìn)劑均能不同程度地增強(qiáng)無(wú)脊椎動(dòng)物的自身免疫力，研究其對(duì)水產(chǎn)養(yǎng)殖貝類免疫系統(tǒng)的影響及其作用機(jī)制，對(duì)貝類免疫學(xué)具有重要的理論意義；而篩選出高效的免疫促進(jìn)劑，對(duì)提高養(yǎng)殖貝類的自身免疫力、降低其死亡率、進(jìn)而提高養(yǎng)殖效益，還具有十分重要的應(yīng)用價(jià)值。目前已有采用免疫促進(jìn)劑提高中國(guó)對(duì)蝦自身免疫力的相關(guān)細(xì)胞和分子作用機(jī)理的研究報(bào)道，但在菲律賓蛤仔中尚未見(jiàn)有研究報(bào)道。 本文以菲律賓蛤仔(Ruditapes philippinarum)的

2、血淋巴為材料，采用脂多糖(LPS)、β-葡聚糖(β-1，3-glucan)、滅活哈維氏弧菌和滅活鰻弧菌四種免疫促進(jìn)劑對(duì)菲律賓蛤仔進(jìn)行了免疫刺激，利用離子交換柱層析和凝膠過(guò)濾柱層析對(duì)酚氧化酶(phenoloxidase，PO)進(jìn)行了分離純化，并以L-二羥苯丙氨酸(L-DOPA)作為特異性底物對(duì)其酶活性進(jìn)行了測(cè)定，對(duì)上述免疫促進(jìn)劑對(duì)菲律賓蛤仔PO產(chǎn)量及活性的影響進(jìn)行了研究。 對(duì)經(jīng)LPS、β-葡聚糖、滅活哈維氏弧菌和滅活鰻弧菌刺激前后

3、菲律賓蛤仔血淋巴中酚氧化酶純化樣品的蛋白濃度及酶活性的研究結(jié)果顯示，經(jīng)上述四種免疫促進(jìn)劑刺激后菲律賓蛤仔酚氧化酶的產(chǎn)量分別提高了103.45％、65.52％、17.24％和27.59％，總酶活性分別提高了105.9％、64.7％、17.65％和29.41％，單位酶活性幾乎沒(méi)有變化。表明四種免疫促進(jìn)劑均能不同程度促進(jìn)菲律賓蛤仔酚氧化酶總酶活性提高，且這種促進(jìn)作用是通過(guò)提高酚氧化酶產(chǎn)量來(lái)完成的。四種免疫促進(jìn)劑中β-葡聚糖對(duì)菲律賓蛤仔酚氧化酶

4、的產(chǎn)量和總酶活性促進(jìn)作用最大。 以菲律賓蛤(Ruditapes philippinarum)的血淋巴為材料，采用脂多糖(LPS)、β-葡聚糖(β-1，3-glucan)、滅活哈維氏弧菌和滅活鰻弧菌四種免疫促進(jìn)劑對(duì)菲律賓蛤仔進(jìn)行了免疫刺激，利用血細(xì)胞計(jì)數(shù)、透射電鏡觀察對(duì)刺激前后菲律賓蛤仔血細(xì)胞的數(shù)量、超微結(jié)構(gòu)進(jìn)行了系統(tǒng)研究。血細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果表明，經(jīng)上述四種免疫促進(jìn)劑刺激后的菲律賓蛤仔總血細(xì)胞數(shù)量分別增加了42.7％、39.56％、4

5、2.0％和83.0％；小顆粒細(xì)胞數(shù)量分別增加了49.49％、41.08％、44.78％和69.02％，說(shuō)明四種免疫促進(jìn)劑均能不同程度促進(jìn)菲律賓蛤仔血細(xì)胞的增殖，且血細(xì)胞數(shù)量的增加主要是通過(guò)小顆粒細(xì)胞數(shù)量的增加實(shí)現(xiàn)的。四種免疫促進(jìn)劑中滅活鰻弧菌對(duì)增加菲律賓蛤仔總血細(xì)胞數(shù)量和小顆粒細(xì)胞數(shù)量的能力最強(qiáng)。對(duì)LPS和β-葡聚糖刺激前后菲律賓蛤仔血細(xì)胞透射電鏡結(jié)果的觀察，發(fā)現(xiàn)菲律賓蛤仔血細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)在免疫刺激后也發(fā)生了變化，三種血細(xì)胞的糙面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)

6、、核糖體和線粒體的數(shù)量均有一定程度的增加，其中以小顆粒細(xì)胞和大顆粒細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)變化幅度最大。經(jīng)滅活哈維氏弧菌和滅活鰻弧菌刺激后，菲律賓蛤仔小顆粒細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)變化幅度較大，但大顆粒細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)變化不明顯。說(shuō)明LPS和β-葡聚糖主要通過(guò)增加血細(xì)胞數(shù)量、proPO激活系統(tǒng)組分蛋白的產(chǎn)量來(lái)增強(qiáng)菲律賓蛤仔免疫力，而滅活哈維氏弧菌和滅活鰻弧菌則通過(guò)增加大顆粒細(xì)胞及小顆粒細(xì)胞的數(shù)量，進(jìn)而增加PO產(chǎn)量和血細(xì)胞的吞噬能力。 綜合研究結(jié)果可得出如

7、下結(jié)論：以上四種免疫促進(jìn)劑之所以能夠增強(qiáng)菲律賓蛤仔自身免疫力，是通過(guò)刺激血細(xì)胞(主要為小顆粒細(xì)胞)數(shù)量增多、改變血細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)，進(jìn)而增加酚氧化酶產(chǎn)量，最終提高酚氧化酶的總酶活性來(lái)實(shí)現(xiàn)的。這是首次在國(guó)際上提出了LPS、β-葡聚糖、滅活哈維氏弧菌和滅活鰻弧菌對(duì)提高菲律賓蛤仔免疫力的細(xì)胞和分子作用機(jī)理，不僅對(duì)揭示貝類等無(wú)脊椎動(dòng)物非特異性免疫機(jī)理具有重要的理論意義，而且為四種免疫促進(jìn)劑應(yīng)用于貝類養(yǎng)殖業(yè)，增強(qiáng)養(yǎng)殖貝類免疫力，提供一定的理論基礎(chǔ)和科