PINX1與肝癌臨床病理特性的相關(guān)性研究.pdf

1、研究背景:
　　 腫瘤發(fā)生浸潤和轉(zhuǎn)移是復(fù)雜而有序的多階段生物學(xué)過程，受多個基因的調(diào)控，許多研究發(fā)現(xiàn)腫瘤的基因組存在遺傳不穩(wěn)定性，容易發(fā)生微衛(wèi)星不穩(wěn)定(microsatelliteinstablility，MSI)和雜合性缺失(lossofheterozygosity，LOH)。Pinx1(Pin2/TRFl-interactingprotein)是近年來在人及酵母細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)的定位于染色體8p23這一位點(diǎn)的新端粒酶/端粒調(diào)控因子，

2、這一位點(diǎn)處在多種腫瘤的高頻雜合缺失區(qū)域，體外實(shí)驗(yàn)和體內(nèi)裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)腫瘤細(xì)胞中PinX1或PinX1-TID的過表達(dá)能抑制端粒酶活性，使端粒縮短[17]。而內(nèi)源性PinX1的缺失則可增加端粒酶活性并延長端粒，也可增加裸鼠的腫瘤發(fā)生。在腎癌、卵巢癌和肺癌等研究中發(fā)現(xiàn)，Pinx1在癌組織中的表達(dá)明顯低于癌旁正常組織，說明PinX1基因可能參與控制細(xì)胞增殖。將PinX1基因?qū)隨MMC-7721肝癌細(xì)胞后發(fā)現(xiàn)該細(xì)胞的生長受到明顯的抑制，說明

3、PinX1基因?qū)Ω伟┘?xì)胞的生長是有抑制作用的，但關(guān)于PinX1基因在肝癌中的表達(dá)和遺傳不穩(wěn)定性與肝癌臨床病理關(guān)系的研究還鮮見報導(dǎo)，本文研究PinX1基因在肝癌中的LOH和MSI及PinX1蛋白的表達(dá)情況，分析其與肝癌臨床病理特性之間的關(guān)系，為闡明PINX1基因如何影響肝癌發(fā)生發(fā)展及研究抑癌基因在腫瘤中的作用機(jī)制提供理論依據(jù)。
　　 研究目的:
　　 研究Pinx1基因D8S277位點(diǎn)在肝癌中的微衛(wèi)星不穩(wěn)定(MSI)和雜合

4、性缺失(LOH)，以及這種遺傳不穩(wěn)定性在肝癌中對Pinx1蛋白表達(dá)的影響。闡明Pinx1基因遺傳不穩(wěn)定性以及Pinx1蛋白表達(dá)變化與肝癌發(fā)生、發(fā)展的關(guān)系，揭示Pinx1基因在肝癌中作為抑癌基因是怎樣影響肝癌發(fā)生發(fā)展，為研究抑癌基因在腫瘤中的作用機(jī)制提供理論依據(jù)。
　　 研究方法:
　　 (1)Pinx1蛋白的表達(dá)采用Envision免疫組織化學(xué)染色的方法進(jìn)行檢測。(2)Pinx1蛋白表達(dá)檢測后采用Image-proPlu

5、s計算機(jī)圖像分析軟件進(jìn)行分析。(3)石蠟包埋的肝癌組織DNA基因提取，采用苯酚-氯仿抽提法。(4)Pinx1基因D8S277位點(diǎn)的DNA基因提取后采用PCR-單鏈構(gòu)象多態(tài)性(SSCP)方法進(jìn)行擴(kuò)增，并采用聚丙烯酰胺凝膠電泳及常規(guī)銀染檢測MSI及LOH。(5)采用SPSS軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行相關(guān)性統(tǒng)計分析。
　　 研究結(jié)果:
　　 1)肝癌Pinx1基因微衛(wèi)星D8S277位點(diǎn)LOH的檢出率為35.71％(10/28)，與腫瘤的分

6、化程度有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、有無包膜浸潤及分期之間均不具有差異(P＞0.05)。2)MSI的檢出率為10.71％(3/28)，與腫瘤的分化程度有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、有無包膜浸潤及分期之間均不具有差異(P＞0.05)。3)Pinx1陽性蛋白在癌周正常組織高表達(dá)，在腫瘤組織中低表達(dá)或不表達(dá)，Pinx1陽性蛋白在肝癌患者腫瘤組織中的檢出率為32.14％(9/28)，與肝癌患者的有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤的分化程度及分期之間不具有相關(guān)性(P＞0.05)，但與腫瘤

7、包膜浸潤之間具有相關(guān)性(P＜0.05)4)Pinx1蛋白表達(dá)與微衛(wèi)星D8S277位點(diǎn)的LOH及MSI之間不具有相關(guān)性(P＞0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 在肝癌組織中存在Pinx1蛋白表達(dá)的下降，Pinx1蛋白的表達(dá)與腫瘤包膜浸潤之間具有相關(guān)性，是抑制腫瘤發(fā)展的影響因素，Pinx1基因微衛(wèi)星D8S277位點(diǎn)的MSI及LOH，與Pinx1蛋白表達(dá)及肝癌相關(guān)病理特性之間未見相關(guān)性，可能不是影響Pinx1蛋白表達(dá)及肝癌發(fā)生發(fā)