2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、背景和目的:
  癌癥細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移是腫瘤向惡性方向變化的重要標(biāo)志。大部分癌癥患者死亡并非死于原發(fā)性癌而是轉(zhuǎn)移性癌。因此,本課題利用胃癌細(xì)胞模型,深入探討癌癥的侵襲和轉(zhuǎn)移機(jī)制,對胃癌的治療和預(yù)后具有重要的意義。
  上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)是胚胎發(fā)育過程中的基本現(xiàn)象。它不僅參與胚胎形成與發(fā)育,同時(shí)在腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移過程中起著至關(guān)重要的作用,TGF-β信號是EM

2、T的主要誘導(dǎo)因子之一。AMPK(單磷酸腺苷活化激酶,AMP-activited Protein Kinase)是細(xì)胞內(nèi)能量感受器,調(diào)控生物體內(nèi)能量平衡。目前關(guān)于AMPK對TGF-β誘導(dǎo)的EMT及腫瘤侵襲遷移調(diào)節(jié)的的系統(tǒng)性研究尚未見報(bào)道。因此,本課題旨在研究AMPK對TGF-β誘導(dǎo)的上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)及細(xì)胞侵襲遷移的調(diào)節(jié)作用。
  研究方法:
  1.胃癌組織中AMPK活性與EMT相關(guān)指標(biāo)的表達(dá):以免疫組化技術(shù)對不同臨床

3、分期的胃癌標(biāo)本中的AMPK活性與EMT指標(biāo)的表達(dá)進(jìn)行相關(guān)性分析。同時(shí)從醫(yī)院組織標(biāo)本庫冷凍保存(-86℃)的標(biāo)本中,選取16例標(biāo)本,以免疫印跡技術(shù)檢測AMPK活性和EMT指標(biāo),分析兩者的相關(guān)性。
  2.胃來源細(xì)胞株中AMPK活性與EMT相關(guān)指標(biāo)的表達(dá):以免疫印跡技術(shù)在胃來源細(xì)胞株中檢測AMPK活性和EMT指標(biāo)的表達(dá)。以劃痕實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞的遷移能力。
  3. TGF-β誘導(dǎo)EMT的發(fā)生:以免疫印跡技術(shù)檢測在TGF-β作用SGC

4、-7901和MKN-28細(xì)胞不同時(shí)間后EMT相關(guān)蛋白的表達(dá),以劃痕實(shí)驗(yàn)來觀察細(xì)胞形態(tài)變化和細(xì)胞遷移能力。
  4. AMPK抑制TGF-β誘導(dǎo)的EMT:以免疫印跡技術(shù)檢測二甲雙胍在作用細(xì)胞不同時(shí)間后AMPK磷酸化蛋白表達(dá)。以免疫印跡技術(shù)檢測二甲雙胍與TGF-β聯(lián)合作用細(xì)胞后EMT相關(guān)蛋白表達(dá),以進(jìn)一步證明AMPK的激活是否能抑制EMT的發(fā)生。以劃痕實(shí)驗(yàn)、Transwell實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞的侵襲遷移能力來觀察AMPK對細(xì)胞生物行為學(xué)的影

5、響。
  結(jié)果:
  1.胃癌組織中AMPK活性與EMT相關(guān)指標(biāo)的表達(dá):在不同臨床分期的胃癌標(biāo)本中 p-AMPK,E-cadherin隨著分期的上升而表達(dá)下降, P-smad2,Vimentin,N-cadherind隨著分期的上升而表達(dá)增加。其中p-AMPK與P-smad2,Vimentin,N-cadherin的表達(dá)負(fù)相關(guān),與E-cadherin的表達(dá)正相關(guān)。在16例標(biāo)本中 P-smad2,Vimentin,N-cadh

6、erin的表達(dá)均高于癌旁組織,而p-AMPK,E-cadherin的表達(dá)卻在癌旁組織中高于胃癌組織。提示在胃黏膜癌變過程中p-AMPK對EMT起調(diào)節(jié)作用。
  2.胃來源細(xì)胞株中AMPK活性與EMT相關(guān)指標(biāo)的表達(dá):胃癌細(xì)胞株(MKN28,SGC-7901,823)中Vimentin,N-cadherin表達(dá)均低,可以篩選為誘導(dǎo)EMT的細(xì)胞。
  3. TGF-β誘導(dǎo)EMT的發(fā)生:隨著TGF-β作用時(shí)間延長,細(xì)胞逐漸形成梭形,

7、間充質(zhì)化表型逐漸顯現(xiàn);SGC-7901和 MKN-28細(xì)胞中間充質(zhì)特性蛋白Vimentin,N-cadherin,β-catenin表達(dá)逐漸增強(qiáng),上皮特性蛋白E-cadheirn表達(dá)降低。
  4. AMPK抑制TGF-β誘導(dǎo)的EMT:p-AMPK,p-ACC的表達(dá)隨metformin處理時(shí)間的延長而逐漸增加;Metformin與 TGF-β聯(lián)合處理細(xì)胞后,EMT間充質(zhì)性蛋白表達(dá)較TGF-β組明顯降低;劃痕實(shí)驗(yàn)中TGF-β誘導(dǎo)后細(xì)

8、胞遷移距離較長,而metformin+TGF-β聯(lián)合處理后,細(xì)胞遷移距離明顯減短。Transwell實(shí)驗(yàn)中TGF-β誘導(dǎo)之后侵襲細(xì)胞數(shù)增多,而metformin+TGF-β聯(lián)合處理后,侵襲的細(xì)胞數(shù)明顯降低;
  結(jié)論:
  1.胃癌臨床標(biāo)本中的 AMPK活性下降伴有 EMT指標(biāo)的上升,并且與胃癌轉(zhuǎn)移程度密切相關(guān);提示 EMT指標(biāo)的上升與 AMPK活性有關(guān);
  2. AMPK被活化后,EMT表型將顯著下降,細(xì)胞實(shí)驗(yàn)證明

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