IL-8在類風濕性關節(jié)炎滑膜增生中的作用探討.pdf

1、趨化性細胞因子(chemokine)是一類可誘導的，分子量為7～10kDa的促炎細胞因子，可由多種細胞產生，具有激活和趨化白細胞的作用。近年發(fā)現趨化因子除了刺激多種細胞發(fā)生趨化游走外，在腫瘤細胞增殖中還具有生長因子樣作用。大量炎性細胞所分泌的趨化因子是否具有促進FLS增殖，最終導致滑膜細胞的增生成為我們關注的重點。本研究以類風濕性關節(jié)炎的成纖維樣滑膜細胞為研究對象，檢測趨化因子中最常見的IL-8的A型受體CXCR1在該細胞表面的表達情況

2、，再給予相應配體IL-8刺激，以求探明IL-8在RA滑膜增生這一病理過程中的作用。為了確認CXCR1是否在RAFLS中表達，我們分別從mRNA和蛋白水平進行了檢測。首先收集并培養(yǎng)了源自臨床手術切除的RA病人滑膜組織的FLS細胞，用RT-PCR和Western-blot的方法檢測到了CXCR1的表達，再以臨床獲得的RA滑膜病理標本制成石蠟切片，用免疫組織化學的方法亦在蛋白水平證實了CXCR1的表達。 我們將體外培養(yǎng)人類風濕性關節(jié)炎

3、的滑膜成纖維細胞，分組后分別加入不同濃度IL-8刺激，細胞計數法檢測其對FLS增殖的影響[。結果發(fā)現IL-8對常規(guī)培養(yǎng)條件下的FLS有直接的促增殖作用，并具有量效關系(在150ng/ml-250ng/ml的濃度范圍內逐漸增強)。 我們通過RT-PCR的方法從原代培養(yǎng)的類風濕性關節(jié)炎患者滑膜成纖維細胞中克隆得到CXCR1的全長基因，測序正確后將其亞克隆入pTREhyg載體中。用脂質體將pTet-on質粒和CXCR1-pTREhyg

4、共轉染入NIH3T3細胞，以不同濃度的強力霉素誘導，用Westernblot檢測CXCR1蛋白表達水平。結果顯示：我們所構建的可調控性表達載體能在NIH3T3細胞內表達，不同濃度藥物誘導的CXCR1表達水平明顯不同；同時還觀察到IL-8刺激后，NIH3T3細胞中Erk-1/2磷酸化水平升高。 通過以上研究，我們得出初步結論：IL-8和CXCR1可能通過Erk等信號轉導分子調控RA中FLS的增殖，最終參與類風濕性關節(jié)炎的發(fā)生或發(fā)展