植物乳桿菌粘附特性及對病原菌粘附的抑制作用研究.pdf

1、益生菌對腸黏膜的粘附是其發(fā)揮生物屏障、營養(yǎng)、免疫、抗腫瘤等生物學功能的基礎。因此研究益生菌的粘附作用對開發(fā)高效、安全的微生態(tài)制劑提供了必要的理論依據和技術支持。 本試驗以植物乳桿菌為研究對象，首先采用鹽凝聚法(SAT)和微生物粘著碳羥化合物法(MATH)測定了4株乳酸菌(植物乳桿菌、糞腸球菌、乳酸乳球菌、干酪乳桿菌)的表面疏水性，作為細菌粘附力高低的初篩指標。結果顯示，兩種方法測定均是植物乳桿菌的疏水性最高，SAT測定時植物乳桿

2、菌在0.1mol/L．的(NH<,4>)<,2>SO<,4>中凝聚，為高疏水性細菌；MATH測定疏水性H％達到35.34±3.00。隨后采用革蘭氏染色法檢測了這4株菌對體外培養(yǎng)的上皮細胞Caeo-2細胞的粘附，植物乳桿菌的粘附力最強，達9.6±0.02CFU/細胞，所以細菌表面疏水性可以作為細菌粘附力的初篩指標。 在此基礎上我們研究了不同濃度、時間、滅活方法和生化試劑處理對植物乳桿菌粘附力的影響。植物乳桿菌對Caeo-2細胞的粘

3、附有明顯的濃度和時間依賴性，粘附2h后達到飽和； 100℃水浴10min滅活和紫外照射30min滅活后植物乳桿菌仍能很強的粘附于Caco-2細胞表面，但植物乳桿菌菌液經胰蛋白酶、高碘酸鈉處理以及菌體用磷酸緩沖液(PBS)懸浮后粘附數急劇降低(p<0.01)。說明其粘附素極有可能是糖蛋白類物質，存在于細菌表面及其耗盡培養(yǎng)上清中，且對熱和紫外線不敏感。胰蛋白酶漂洗細胞也極顯著降低了該菌對Caco-2細胞的粘附(p<0.01)，但高碘酸鈉漂洗

4、細胞對該菌的粘附影響不顯著(p>0.05)，揭示細胞上的粘附素受體可能是蛋白質，但葡萄糖、乳糖、果糖、甘露糖均極顯著降低植物乳桿菌對細胞的粘附，其中又以甘露糖最為顯著，表明Caeo-2細胞上的粘附素受體可能含有這四種糖相似的結構，所以細胞上粘附素受體還有待進一步研究。 作為益生菌須對病原菌有抑制作用，我們研究了不同處理的植物乳桿菌對大腸桿菌和沙門氏菌粘附的抑制作用。植物乳桿菌發(fā)酵液、耗盡培養(yǎng)上清液、100℃水浴10min滅活、紫

5、外照射30min滅活的植物乳桿菌發(fā)酵液和磷酸緩沖液(PBS)懸浮的植物乳桿菌菌體對大腸桿菌粘附Caco-2細胞的抑制率分別為71.2％、69.2％、65.2％、70.6％、37.2％；對沙門氏菌粘附的抑制率分別為90.9％、91.4％、95.1％、91.8％、88.4％，而和植物乳桿菌發(fā)酵液相同pH的醋酸和乳酸混合液對大腸桿菌和沙門氏菌的抑制率僅分別為22.3％和24.1％。由此可知無論是存活還是死亡的植物乳桿菌均能極顯著(p<0.01