生長抑素聯(lián)合清胰湯對腸道白色念珠菌感染小鼠的實(shí)驗(yàn)性研究.pdf

1、目的:
　　利用生長抑素（Somatostatin，SST）聯(lián)合中藥清胰湯合劑（QingYitang,QYT）干預(yù)腸道白色念珠菌感染的小鼠，觀察腸道組織中HE染色、腸道組織病理學(xué)評分、CFU菌落計(jì)數(shù)、用Tunel法及免疫組化技術(shù)檢測腸道組織凋亡細(xì)胞及凋亡基因Bax、Bcl-2的表達(dá)，對比采用單一及聯(lián)合應(yīng)用生長抑素和中藥清胰湯合劑進(jìn)行干預(yù)，研究探討其對其腸粘膜屏障保護(hù)作用的可能機(jī)制。
　　方法
　　取健康SPF級（Spe

2、cefic pathogen Free,無特定病原體）昆明雌性小鼠100只，體重18-20g，4周齡，采用隨機(jī)分組方式抽取20只為空白對照組（N）；80只用于建造腸道白色念珠菌感染造模組，分組后各組小鼠的體重?zé)o明顯差異。兩周后，從正常對照組及造模組中各隨機(jī)抽取5只小鼠，取其腸道組織行CFU菌落及時(shí)、HE染色并光學(xué)顯微鏡下觀察，證實(shí)腸道感染白色念珠菌模型成功。將造模組剩余的64只小鼠（造模期間死亡11只）采用隨機(jī)分組方式分成模型組及實(shí)驗(yàn)組

3、（生長抑素組、清胰湯、聯(lián)合用藥組），分別進(jìn)行藥物干預(yù)治療。生長抑素組小鼠給予濃度為0.08mg/ml生長抑素尾靜脈注射，0.2ml/只，Q6h；清胰湯組小鼠給予清胰湯灌胃0.5ml/只,Q6h；生長抑素+清胰湯聯(lián)合用藥組小鼠按前述方法同時(shí)等量給藥；空白對照組及模型組在同一時(shí)間給予等量生理鹽水尾靜脈注射或灌胃；藥物等量持續(xù)干預(yù)7天，連續(xù)觀察小鼠一般情況；干預(yù)治療后及空白對照小鼠，采用頸椎脫臼法將其處死，無菌取出小鼠的回腸末端、回盲部及右半

4、結(jié)腸部分的腸道組織進(jìn)行HE鏡下觀、腸道內(nèi)容物的白色念珠菌菌落計(jì)數(shù)、腸道組織病理學(xué)評分、用Tunel法及免疫組化技術(shù)檢測腸道組織凋亡細(xì)胞及凋亡基因Bax、Bcl-2的表達(dá)，同時(shí)采用圖像分析系統(tǒng)對其結(jié)果進(jìn)行量化分析。所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±S）的方式表示，結(jié)合SPSS18.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。
　　結(jié)果
　　1、模型成功率為86.25％。
　　2、一般情況：大體觀察可見空白對照組小鼠一般情況好，活潑好動、毛發(fā)有

5、光澤；模型組小鼠可見精神差、飲食減少、基本不活動、毛發(fā)散亂、無光澤等；治療組小鼠精神較好，稍有活動，毛發(fā)稍有光澤；麻醉消毒，打開腹腔后，發(fā)現(xiàn)空白對照組小鼠腸道組織無明顯異常，組織紅潤，腸蠕動功能正常；而模型組小鼠出現(xiàn)腸管壁充血及水腫、部分有腸管壞死，腸腔脹氣，腹腔有少量暗紅色積液；治療組小鼠為腸道組織顏色稍紅潤，管壁稍有充血及水腫，腸腔脹氣消失。
　　3、腸道內(nèi)容物白色念珠菌菌落（CFU）計(jì)數(shù)情況：空白對照組、模型組、生長抑素組、

6、清胰湯組、聯(lián)合用藥組腸道內(nèi)容物均出現(xiàn)不同程度的白色念珠菌生長，在科瑪嘉培養(yǎng)基上呈現(xiàn)翠綠色的光滑菌落；通過菌落培養(yǎng)計(jì)數(shù)，證實(shí)白色念珠菌菌落計(jì)數(shù)與空白對照組相比，模型組明顯增多（P<0.05），藥物干預(yù)后，治療組的菌落計(jì)數(shù)均有不同程度下降，有差異性（P<0.05），以聯(lián)合用藥組最為顯著（P<0.05）。
　　4、病理學(xué)檢測及病理學(xué)評分：光學(xué)顯微鏡下空白對照組小鼠腸道組織腺體結(jié)構(gòu)排列整齊、完整，粘膜及粘膜下層無毛細(xì)血管淤血、腺體腫脹、炎

7、癥細(xì)胞聚集、彌散分布等特點(diǎn)；模型組小鼠腸道組織可見上皮下間隙增大，粘膜及粘膜下充血腫脹，腺體排列紊亂，毛細(xì)血管及微小靜脈擴(kuò)張充血，腸粘膜細(xì)胞壞死、脫落，可見炎性細(xì)胞聚集、浸潤，病理學(xué)評分結(jié)果證實(shí)，兩組相比有顯著的差異性（P<0.05）。藥物干預(yù)后，治療組粘膜層及粘膜下層、固有層間隙變小，腺體排列稍整齊，血管稍有擴(kuò)張，脫落及壞死減輕，可見少量炎性細(xì)胞在腸腔內(nèi)存在，病理學(xué)評分結(jié)果以聯(lián)合用藥組最為顯著（P<0.05）。
　　5、腸道粘膜

8、細(xì)胞的凋亡檢測及凋亡指數(shù)：腸粘膜凋亡檢測細(xì)胞表達(dá)部位在細(xì)胞核處，陽性細(xì)胞表達(dá)?？瞻讓φ战M可見少量凋亡細(xì)胞，模型組小鼠粘膜細(xì)胞可見細(xì)胞體積縮小、變形，與周圍的細(xì)胞間隙增大，胞質(zhì)濃縮、胞膜裂解成塊狀，嚴(yán)重者可見以凋亡小體形成等特點(diǎn)的凋亡細(xì)胞，細(xì)胞核中呈現(xiàn)棕黃色或黃褐色。藥物干預(yù)后，在腸道組織病理學(xué)評分中凋亡細(xì)胞的表達(dá)有不同的減輕，與模型組相比有顯著差異性（P<0.05）；藥物干預(yù)后，凋亡細(xì)胞有不同程度的表達(dá)，以聯(lián)合用藥組差異最為顯著（P<0

9、.05）。
　　6、腸粘膜凋亡基因Bax表達(dá)：Bax表達(dá)部位在包漿處，主要分布于粘膜細(xì)胞層及腺體，呈棕黃色陽性細(xì)胞表達(dá)，有時(shí)呈彌散性分布的特點(diǎn)。與空白對照組相比，模型組的Bax表達(dá)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。治療組與模型組相比，Bax表達(dá)均有不同程度表達(dá)，但它們之間無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P﹥0.05）。
　　7、腸粘膜凋亡基因Bcl-2表達(dá)：Bcl-2表達(dá)部位在包漿處，主要分布于粘膜細(xì)胞層及腺體，呈棕黃色陽性細(xì)胞表達(dá)。與空白對