救腦寧注射液治療實(shí)驗(yàn)性腦血腫家兔的作用及其機(jī)制研究.pdf

1、出血性中風(fēng)多發(fā)生在中、老年高血壓病人,是一種常見、多發(fā)病,由于其高病死率、高致殘率,嚴(yán)重危害人類健康.近年來,大量文獻(xiàn)顯示,人們對缺血再灌注損傷所致的缺血性中風(fēng)研究較多,而對出血性中風(fēng)研究相對較少.該研究是在我們已往多年的工作基礎(chǔ)上,以活血化瘀、清熱解毒、化痰開竅法方藥—救腦寧注射液為基礎(chǔ),以腦血腫周圍損傷組織的神經(jīng)細(xì)胞凋亡變化為切入點(diǎn),從整體、細(xì)胞、分子、基因水平深入探討中醫(yī)藥對實(shí)驗(yàn)性腦血腫以及原代神經(jīng)細(xì)胞擬缺血再灌注損傷的保護(hù)作用,

2、這將對指導(dǎo)中醫(yī)臨床及深入研究中醫(yī)藥有效方劑的作用機(jī)制提供實(shí)驗(yàn)依據(jù).該論文包括三部分:(1)救腦寧注射液對實(shí)驗(yàn)性腦血腫家兔治療作用的研究:復(fù)制家兔實(shí)驗(yàn)性腦血腫模型,觀察腦組織病理學(xué)變化的演變規(guī)律,以及救腦寧注射液的治療效應(yīng);(2)救腦寧注射液對缺血再灌注誘導(dǎo)原代神經(jīng)細(xì)胞損傷的影響:在體外培養(yǎng)神經(jīng)細(xì)胞擬缺血再灌注損傷模型上,觀察救腦寧注射液抗損傷作用的細(xì)胞代謝、形態(tài)學(xué)與凋亡變化;(3)救腦寧注射液改善缺血再灌注所致原代神經(jīng)細(xì)胞凋亡及其調(diào)控機(jī)

3、制的研究:從細(xì)胞、分子、基因水平,在原代神經(jīng)細(xì)胞擬缺血再灌注損傷模型基礎(chǔ)上,試圖從凋亡發(fā)生的兩條主要途徑:線粒體途徑和死亡受體途徑、Caspase-3蛋白酶級(jí)聯(lián)反應(yīng)以及相關(guān)的上游調(diào)控基因等方面闡明救腦寧注射液抗神經(jīng)細(xì)胞凋亡的作用環(huán)節(jié)與機(jī)制.家兔腦血腫整體動(dòng)物實(shí)驗(yàn)分為六組:正常對照組(Control),模型組(Model),救腦寧高劑量組(JNN-H),中劑量組(JNN-M),低劑量組(JNN-L)和清開靈注射液組(QKL).實(shí)驗(yàn)各組分別

4、在造模后3、7、15天(d)取材,觀察動(dòng)物一般情況、腦系數(shù)、腦組織含水量、腦組織HE、Nissl's、Mallory染色、投射電鏡形態(tài)學(xué)變化以及TUNEL染色顯示凋亡細(xì)胞等指標(biāo)變化,并采用計(jì)算機(jī)圖像分析系統(tǒng)對相關(guān)形態(tài)學(xué)指標(biāo)進(jìn)行定量分析.體外培養(yǎng)神經(jīng)細(xì)胞擬缺血再灌注損傷實(shí)驗(yàn)也同樣分為上述六組即:Control,Model,JNN-H,JNN-M,JNN-L,QKL.實(shí)驗(yàn)各組分別于單純?nèi)毖?小時(shí)(h)及缺血2h+再灌注4h取材,檢測細(xì)胞代謝

5、率(MTT)、乳酸脫氫酶(LDH)漏出率、細(xì)胞凋亡率(流式細(xì)胞技術(shù))、形態(tài)學(xué)、細(xì)胞DNA和RNA變化(AO染色)、線粒體膜電位(流式細(xì)胞技術(shù))、細(xì)胞內(nèi)pH值(流式細(xì)胞技術(shù))、細(xì)胞內(nèi)bcl-2/bax、Fas/FasL、Caspase-3蛋白的表達(dá)以及RT-PCR檢測bcl-2/bax mRNA表達(dá)等指標(biāo)變化,用計(jì)算機(jī)圖像分析系統(tǒng)對相關(guān)指標(biāo)進(jìn)行定量分析.結(jié)論:實(shí)驗(yàn)采用的整體與細(xì)胞模型穩(wěn)定,結(jié)果可靠.研究表明救腦寧注射液對實(shí)驗(yàn)性腦血腫及原代