蠟狀芽孢桿菌（Bacillus cereus）防治草莓病害的功效及其分子鑒別研究.pdf

1、蠟狀芽孢桿菌(Bacillus Cereus)TSO2是由本研究室自主分離到的一株具有生防作用的菌株，經(jīng)室內(nèi)外藥效試驗(yàn)證明該菌株對(duì)草莓白粉病有較強(qiáng)的拮抗作用。為了解決傳統(tǒng)的培養(yǎng)計(jì)數(shù)方法檢測(cè)微生態(tài)調(diào)節(jié)劑中益生菌種的難題，從而為微生態(tài)調(diào)節(jié)劑產(chǎn)品的鑒定和質(zhì)量監(jiān)控提供新的技術(shù)支持，本試驗(yàn)從分子水平上對(duì)該菌種進(jìn)行了鑒別，具體試驗(yàn)結(jié)果如下： 參照中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)農(nóng)藥田間藥效試驗(yàn)準(zhǔn)則，在室外條件下進(jìn)行蠟狀芽孢桿菌TSO2對(duì)草莓白粉病的藥

2、效防治試驗(yàn)。試驗(yàn)結(jié)果表明：蠟狀芽孢桿菌TSO2可以防治草莓白粉病，活菌數(shù)在3×10<'7>CFU/ml以上的濃度可達(dá)到理想的作用效果，最高防效可達(dá)到52.23％；抑制作用是活菌和菌分泌的抑菌物質(zhì)共同作用的結(jié)果。在蠟狀芽孢桿菌防治草莓白粉病田間試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，在室內(nèi)條件下初步探討了蠟狀芽孢桿菌防治草莓白粉病的機(jī)理。研究結(jié)果表明：蠟狀芽孢桿菌可抑制病原菌的定殖，從而達(dá)到防治草莓白粉病的效果。 通過PCR擴(kuò)增TSO2的16s rDNA全

3、長(zhǎng)片段，測(cè)序后輸入GenBank中與已知序列進(jìn)行比較分析，該序列與蠟狀芽孢桿菌16S rDNA序列同源性達(dá)到99％。證明：TSO2是一株蠟狀芽孢桿菌菌株，從分子水平上對(duì)TSO2進(jìn)行了分子鑒定，采用RAPD-PCR方法對(duì)蠟狀芽孢桿菌TSO2及其親緣關(guān)系相近的5株芽孢桿菌(地衣芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌、凝結(jié)芽孢桿菌、巨大芽孢桿菌、短小芽孢桿菌)進(jìn)行了RAPD條帶特異性分析。采用本研究?jī)?yōu)化的RAPD方法，利用篩選出的6個(gè)引物，從蠟狀芽孢桿菌TS

4、O2基因組中篩選獲得了一條513 bp的特異RAPD標(biāo)記，利用分子克隆技術(shù)將該特異標(biāo)記轉(zhuǎn)化為穩(wěn)定的SCAR標(biāo)記。根據(jù)序列分析設(shè)計(jì)特異性引物進(jìn)行目的片段擴(kuò)增，結(jié)果證明此引物只在TSO2中擴(kuò)增得到目的片段，而其余13株參照菌株(7株芽孢桿菌，5株乳酸菌，1株沼澤紅假單胞菌)擴(kuò)增為陰性，從而證明試驗(yàn)得到了在種水平上對(duì)該菌種進(jìn)行準(zhǔn)確鑒定的特異標(biāo)記。 在得到蠟狀芽孢桿菌TSO2種水平上鑒定的特異標(biāo)記的基礎(chǔ)上，通過PCR條件的優(yōu)化，特異引物