稻瘟菌中富含半胱氨酸小分泌蛋白可視化定位與功能分析.pdf

1、病原真菌需要通過分泌毒力因子來侵染寄主。最新的研究發(fā)現(xiàn)，真菌將效應子蛋白分泌到一個可能會抑制寄主的防御機制并促進菌體在植物細胞之間定殖的膜復合體上，然后將其轉運進植物活細胞。Ebbole教授通過比對稻瘟病菌物種綜合的基因組，從氨基酸大小為180的高半胱氨酸含量蛋白家族中鑒定出了一個新的蛋白家族，并將其暫命名為稻瘟病菌富含半胱氨酸小分泌蛋白(MoSCRiS)家族。在不同菌株中，大多數(shù)旁系同源蛋白序列存在增加、丟失、閱讀框移碼和提前的終止密

2、碼等現(xiàn)象，揭示了這個蛋白家族成員基因序列的多樣性。
　　本實驗通過半定量PCR檢測了該蛋白家族成員在不同階段的表達水平，發(fā)現(xiàn)該家族成員在侵染階段存在差異表達。本實驗以此為依據(jù)將該家族成員作為候選的效應子來研究。以Rp27啟動子表達櫻桃紅熒光蛋白為對照，Rp27啟動子表達的帶櫻桃紅熒光蛋白標簽的MoSCRiS1在附著胞、孢子、菌絲和侵染階段均有表達且與對照有著明顯差異。MoSCRiS1的過量表達還呈現(xiàn)出在不同寄主上的定位與致病性差異

3、。MoSCRiS2和已知的無毒效應子類似，優(yōu)先定位于活體營養(yǎng)界面復合體（BICs），雖然MoSCRiS3、MoSCRiS5和MoSCRiS6與MoSCRiS2有著相同的定位，但是表達量都不高，熒光信號不強。MoSCRiS4則定位于菌絲近細胞壁的穿越點。大部分家族成員的融合表達沒有檢測到熒光信號且敲除也沒有明顯的表型。MoSCRiS1與MoSCRiS2瞬時表達結果顯示這兩個基因的表達不會引起水稻原生質體凋亡，MoSCRiS1具有一段植物定