天然免疫在小鼠腎移植模型及預(yù)致敏心臟移植模型中的作用及機(jī)制的初步探討.pdf

1、本文內(nèi)容分為三部分：
　　第一部分 TLR信號通路中重要轉(zhuǎn)接蛋白 MyD88對小鼠腎移植存活時間及排斥反應(yīng)的影響
　　目的:探討天然免疫反應(yīng) TLR通路中轉(zhuǎn)接蛋白分子 MyD88對小鼠腎移植存活時間及移植腎排斥反應(yīng)的影響
　　方法:建立小鼠腎移植模型,移植小鼠分為同基因移植組:(1)供受體均為 B6 WT小鼠(n=3),(2)供受體均為 BALB/c WT小鼠(n=3);異基因移植組:(1)供體為B6 WT小鼠,受體為

2、 BALB/c WT小鼠(n=10),(2)供體為 B6 WT小鼠,受體為BALB/c MyD88-/-小鼠(n=10)。觀察移植小鼠存活時間;移植后第7天、14天檢測外周血中血肌酐水平。移植后第7天、14天組織病理學(xué)檢測移植腎淋巴細(xì)胞浸潤及腎小球形態(tài)。
　　結(jié)果:B6 WT→BALB/c MyD88-/-組中90％的移植小鼠存活時間超過100天,B6 WT→BALB/c WT組的平均生存時間為36.8天,兩組間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意

3、義(P<0.05)。移植后第7天,B6 WT→BALB/c MyD88-/-組和B6 WT→BALB/c WT組血肌酐水平分別是(0.302±0.07) mg/dL,(1.780±0.40) mg/dL,兩組間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);移植后第14天兩組的血肌酐水平分別是(0.860±0.2)mg/dL,(2.778±0.4) mg/dL,兩組間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。在移植后第7天及14天,B6 WT→BAL

4、B/c MyD88-/-組移植物中炎癥細(xì)胞浸潤的程度明顯低于 B6 WT→BALB/c WT組。B6 WT→BALB/c MyD88-/-組移植腎間質(zhì)中CD4+T細(xì)胞數(shù)量明顯少于 B6 WT→BALB/c WT組,而血管周圍 CD4+T細(xì)胞數(shù)量,兩組間無明顯差異。在術(shù)后第3周,B6 WT→BALB/c MyD88-/-組中腎小球結(jié)構(gòu)完整,而B6 WT→BALB/c WT組腎小球多數(shù)呈萎縮,硬化狀態(tài)。
　　結(jié)論:敲除受體 MyD88

5、基因能明顯延長小鼠移植腎臟的存活時間,改善移植腎功能,可能與移植腎中淋巴細(xì)胞浸潤減少和腎小球結(jié)構(gòu)保持相對完整相關(guān)
　　第二部分 MyD88分子在小鼠腎移植中作用機(jī)制的初步研究
　　目的:從 T細(xì)胞功能、B細(xì)胞功能及免疫調(diào)節(jié)等方面探討 MyD88分子在小鼠腎移植中的作用。
　　方法:建立小鼠腎移植模型,移植小鼠分為對照組:供體為 B6 WT小鼠,受體為 BALB/c WT小鼠(n=5)。實(shí)驗組:供體為 B6 WT小鼠,受

6、體為 BALB/c MyD88-/-小鼠(n=5)。小鼠腎移植后第7天,第14天時,分離小鼠脾臟淋巴細(xì)胞進(jìn)行混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng),同時用Luminex系統(tǒng)檢測培養(yǎng)液上清中細(xì)胞因子含量;留取受體小鼠血清,流式細(xì)胞術(shù)檢測供者特異性抗體水平;分離脾臟及移植腎臟淋巴細(xì)胞,流式細(xì)胞術(shù)檢測 Treg細(xì)胞比例。
　　結(jié)果:移植后第14天,當(dāng)用與供體相同種系的小鼠APC刺激時,MyD88-/-組小鼠脾臟淋巴細(xì)胞增殖能力較 WT組小鼠降低(P<0.05

7、)。當(dāng)用無關(guān)第三方小鼠APC刺激時, MyD88-/-組小鼠與 WT小鼠組脾臟淋巴細(xì)胞增殖能力無顯著性差異(P>0.05)。在 Na?ve狀態(tài)下,MyD88-/-小鼠和WT小鼠脾臟淋巴細(xì)胞的增殖能力沒有明顯差異(P>0.05);移植后第7天及第14天 MLR上清液中, MyD88-/-小鼠組 IL-17,IL-6,TNF-α水平較WT組小鼠下降(P<0.05),而IL-4水平升高(P<0.05)。血清中DSA水平亦是MyD88-/-小鼠

8、較 WT小鼠降低,尤其以 IgG2為著(P<0.05),IgG1及IgG3水平亦降低,但是差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05);移植小鼠脾臟中CD4+Foxp3+T細(xì)胞及CD8+Foxp3+T細(xì)胞,MyD88-/-組與 WT組之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。而移植腎臟中,MyD88-/-組中CD8+Foxp3+T細(xì)胞比例較 WT組明顯升高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
　　結(jié)論:腎移植后,與 WT小鼠比較,MyD88-/

9、-小鼠脾臟淋巴細(xì)胞的增殖能力及炎癥因子的分泌能力下降;B細(xì)胞抗體產(chǎn)生能力下降。移植物中CD8+Foxp3+T細(xì)胞比例升高。
　　第三部分:TLR信號通路在預(yù)致敏小鼠心臟移植模型中的作用
　　目的：探討 MyD88及Trif在小鼠預(yù)致敏模型中對血清中供體特異性抗體(Donor specific-antibodies DSA)及脾臟記憶性 T細(xì)胞的影響。
　　方法：實(shí)驗動物分為 Na?ve組(不做移植手術(shù)),對照組(供體為

10、 C3H小鼠,受體為C57BL/6小鼠)和實(shí)驗組(供體為 C3H小鼠,受體為 MyD88及Trif基因敲除小鼠)。采用皮膚移植對受體小鼠進(jìn)行預(yù)致敏,2周后檢測受體小鼠血清中DSA的水平,然后采用與皮膚移植相同的供體對受體小鼠行心臟移植,觀察移植心臟存活時間,在觀察終點(diǎn)時再次檢測受體小鼠血清中的DSA水平,同時檢測受體小鼠脾臟中記憶性 T細(xì)胞的比例。
　　結(jié)果：皮膚移植2周后,實(shí)驗組 DSA IgG2水平低于對照組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義

11、(P<0.05),DSA IgG1和IgG3的水平亦降低,但無顯著性差異(P>0.05)。心臟移植3天后,與對照組相比,實(shí)驗組 DSA IgG2水平明顯降低(P<0.01)。脾臟中記憶性 T細(xì)胞的比例,實(shí)驗組亦比對照組明顯降低(CD4陽性記憶性 T細(xì)胞 P<0.001,CD8陽性記憶性 T細(xì)胞 P<0.05)。然而兩組的移植心臟存活時間無明顯差異。
　　結(jié)論：敲除受體 MyD88及Trif雖然不能延長二次心臟移植的存活時間。但是能