磷酸肌酸鈉對小鼠移植性S-,180-肉瘤生長的影響及其機制的研究.pdf

1、目的：磷酸肌酸鈉（Creatine Phosphate Sodium CP）是一種目前廣泛應(yīng)用于心臟內(nèi)科及心臟外科的心肌保護劑，磷酸肌酸在體內(nèi)主要存在于心肌、骨骼肌和腦等高耗能器官的細(xì)胞內(nèi)，主要通過為機體的高耗能細(xì)胞，如心肌細(xì)胞等，提供能量從而達(dá)到保護心肌的目的，但由于腫瘤細(xì)胞能量代謝高于正常細(xì)胞，因此就磷酸肌酸等能量合劑能否應(yīng)用于腫瘤患者的治療一直存在爭議，本研究擬通過S180荷瘤小鼠實體瘤動物模型，經(jīng)不同濃度藥物處理后，測量各組平均

2、瘤重，計算抑瘤率，測定腫瘤細(xì)胞凋亡率和細(xì)胞周期以及S180移植瘤組織內(nèi)的增殖細(xì)胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen PCNA）蛋白及Bcl-2和Bax表達(dá)水平，從而觀察磷酸肌酸鈉對小鼠S180肉瘤的增殖及凋亡的影響，并初步探討其可能的作用機制。
　　 方法：1、建立動物模型和試驗分組：將60只體重為20-22克的健康雄性昆明小鼠，隨機分為4組（每組15只）：生理鹽水對照組、CP4 mg/

3、d組、CP8 mg/d組、CP16 mg/d組。將S180肉瘤細(xì)胞株接種于各組小鼠右上肢腋窩皮下，建立S180荷瘤小鼠動物模型。2、藥物干預(yù)：接種后次日開始連續(xù)腹腔用藥7天后，終止治療，停藥后24小時頸椎脫臼處死全部動物，立即剝離皮下腫瘤，稱重，計算抑瘤率。3、流式細(xì)胞分析技術(shù)（FCM）測定S180移植瘤組織細(xì)胞周期、凋亡率及PCNA蛋白表達(dá)水平，比較各組之間差異。4、采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）檢測S180移植瘤組織中Bcl

4、-2和Bax的mRNA表達(dá)水平，比較各組之間差異。5、免疫組織化學(xué)法檢測S180肉瘤組織中Bcl-2和Bax蛋白的表達(dá)水平，比較各組之間差異。6、統(tǒng)計學(xué)分析：數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，采用SPSS13.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。多組間均數(shù)差異性比較采用單因素方差分析（one-way ANOVA），并用最小顯著法（least significant difference，LSD）作兩兩比較。P<0.05為差異有顯著性，P<0.01

5、為差異有極顯著性，P>0.05差異無顯著性。
　　 結(jié)果：1、成功建立荷瘤動物模型。2、平均瘤重及抑瘤率：對照組、CP4 mg/d組、CP8 mg/d組、CP16 mg/d組平均瘤重分別為（2.51±0.35）g、（2.42±0.31）g、（2.35±0.28）g、（2.22±0.30）g，與對照組相比CP16 mg/d組小鼠平均瘤重降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；其余各組之間差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。抑瘤率以

6、CP16 mg/d組最高，為11.60％；CP8mg/d組次之，為6.38％；CP4 mg/d組最低，為4.25％。3、流式細(xì)胞分析技術(shù)檢測結(jié)果：（1）、細(xì)胞周期及凋亡率：CP16 mg/d組G0/G1期細(xì)胞比例（33.30±1.34％）較對照組（32.36±1.12％）上升，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；其余各組之間差異均不明顯（P>0.05）。CP16 mg/d組S期細(xì)胞比例（23.57±1.80％）較對照組（25.25±1.5

7、9％）下降，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；其余各組間比較差異無顯著性（P>0.05）。CP16 mg/d組、CP8 nag/d組、CP4 mg/d組和對照組細(xì)胞凋亡率分別為13.21±1.15％、12.98±1.04％、12.70±0.79％、12.53±0.96％，但各組之間比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。（2）、PCNA蛋白：PCNA蛋白的表達(dá)在CP16 mg/d組（313.39±7.04）較對照組（319.42±6.4

8、9）降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），其余各組之間比較均無統(tǒng)計學(xué)差異（P>0.05）。4、逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）檢測結(jié)果：隨著CP劑量的增加Bcl-2及：Bax的表達(dá)各組之間差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。Bcl-2mR-NA/BaxmRNA的比值對照組、CP4mg/d組、CP8 mg/d組以及CP16 mg/d組該比值分別為O.75±0.19、0.75±0.14、0.74±0.17、0.74±0.17，各組間的差

9、別無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。5、免疫組織化學(xué)法檢測結(jié)果：Bcl-2和Bax均以細(xì)胞漿呈棕黃色顆粒狀染色的細(xì)胞為陽性表達(dá)細(xì)胞。隨著CP劑量的增加Bcl-2及Bax蛋白的表達(dá)各組間比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。Bcl-2/Bax的比值在對照組、CP4 mg/d組、CP8 mg/d組、CP16 mg/d組分別為O.34±0.13％、0.32±0.12％、0.31±0.09％、0.31±0.11％，各組間比較均無統(tǒng)計學(xué)差異（P>0

10、.05）。
　　 結(jié)論：本研究表明：1、高劑量的CP減輕移植性小鼠S180肉瘤的重量，中、低劑量的CP對移植性小鼠S180肉瘤的重量無影響。2、高劑量CP可下調(diào)移植性小鼠S180肉瘤的PCNA指數(shù)，并且移植瘤組織的細(xì)胞周期阻滯于G0/G1期，S期細(xì)胞比例下降，抑制了移植性小鼠S180肉瘤的增殖。而中、低劑量的CP對移植性小鼠S180肉瘤的增殖無影響。3、高、中、低劑量的CP對移植性小鼠S180肉瘤的凋亡率無影響，并且對Bcl-2