口腔頜面部惡性腫瘤端粒長(zhǎng)度的研究.pdf

1、浙江大學(xué)碩士學(xué)位論文口腔頜面部惡性腫瘤端粒長(zhǎng)度的研究姓名：張寅申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專(zhuān)業(yè)：口腔臨床醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師：平飛云2000.5.1及手術(shù)切緣組織。其中有原發(fā)腫瘤16例，復(fù)發(fā)腫瘤4例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者8例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者12例。采用DNASouthern雜交法檢測(cè)上述組織的平均端粒長(zhǎng)度。組織標(biāo)本中加入DNA裂解液，經(jīng)蛋白酶K消化，剛傳統(tǒng)的酚一氯仿法提取DNA。用分光光度法測(cè)定DNA濃度和純度。由于人類(lèi)端粒重復(fù)序列(TTAGGG)。內(nèi)部無(wú)限制

2、性?xún)?nèi)切酶Hinfl的酶切位點(diǎn)，所以我們用Hinfl來(lái)消化基因組DNA。酶切后的DNA用^DNA／HindIII作為分子量標(biāo)記，在08％瓊脂糖凝膠中電泳分離。電泳產(chǎn)物經(jīng)變性、中和后，用Southern轉(zhuǎn)印法轉(zhuǎn)移到尼龍膜上。用【Y”P(pán)】ATP標(biāo)記端粒寡核苷酸探針的5’端，標(biāo)記體系與尼龍膜在雜交管中于37“C預(yù)雜交、雜交。經(jīng)放射白顯影后，對(duì)膠片進(jìn)行光密度掃描分析，取掃描主峰位置與分子量標(biāo)記比較后，得出平均末端限制片斷(terminalrest

3、rictionfragments，TRFs)，作為平均端粒長(zhǎng)度。本研究結(jié)果顯示：20例口腔頜面部惡性腫瘤的平均端粒長(zhǎng)度為53653038kb，瘤旁正常組織的平均端粒長(zhǎng)度為96651862kb，兩者相差為43003350kb，差別具有顯著性(P(001)。其中16例口腔頜面部惡性腫瘤的端粒較瘤旁正常組織明顯縮短，2例腫瘤組織的端粒長(zhǎng)度無(wú)明顯變化，而另2例腫瘤組織端粒則有所延長(zhǎng)。結(jié)果支持了“端粒一端粒酶一腫瘤發(fā)生”的假說(shuō)。同時(shí)我們還發(fā)現(xiàn)有6