核轉(zhuǎn)錄因子-κB在實(shí)驗(yàn)性肝纖維化過程中的意義及水飛薊賓抗肝纖維化作用機(jī)制的研究.pdf

1、[目的] 研究核轉(zhuǎn)錄因子-κB在實(shí)驗(yàn)性肝纖維化過程中在肝臟的表達(dá)、分布及意義，探討肝纖維化的發(fā)病機(jī)制。 [方法] 雌性Wistar大鼠70只，體重相近(220g±20g)，隨機(jī)分為正常組(n=6)、肝纖維化模型組(n=32)和PDTC組(n=32)，后兩組各自又被隨機(jī)分為1周，2周，4周和6周組(每組n=8)。PDTC組各組大鼠在給40％CCl4的同時(shí)給予PDTC(150mg/kg/d)灌胃。各組動物按設(shè)計(jì)在1周

2、末、2周末、4周末和6周末實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，用乙醚麻醉，在無菌無熱源條件下，進(jìn)行腹主動脈采血和肝組織取材。常規(guī)HE染色觀察肝臟病變，天狼猩紅膠原染色、肝組織羥脯氨酸(Hyp)含量測定觀察肝纖維化程度，產(chǎn)色基質(zhì)偶氮法鱟試劑定量測定血漿內(nèi)毒素，賴氏法測定血漿丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)，TBA法檢測肝組織丙二醛(MDA)的水平，免疫組化法測定NF-κB和ED2在各組肝臟中的表達(dá)，原位雜交和Western-blot檢測肝纖維化過程中CTGF在肝臟的表

3、達(dá)。 [結(jié)果] 肝纖維化模型組與正常對照組比較：(1)肝纖維化模型組血漿內(nèi)毒素含量從第2周開始顯著升高，以后呈遞增趨勢，于第6周時(shí)達(dá)最高值；肝組織NF-κB表達(dá)從第2周開始顯著升高，呈遞增趨勢，6周時(shí)達(dá)最高；CTGF表達(dá)從第4周開始明顯升高，第6周達(dá)最高，且兩兩都呈正相關(guān)，CTGF表達(dá)升高滯后于血漿內(nèi)毒素含量升高；(2)免疫組化結(jié)果顯示：NF-κBp65在正常肝組織中少量表達(dá)于中央靜脈周圍的肝細(xì)胞胞漿內(nèi)，在模型肝組織可見

4、程度不等的細(xì)胞質(zhì)和(或)細(xì)胞核表達(dá)，主要分布于纖維化區(qū)、肝竇區(qū)、血管壁及部分膽管細(xì)胞、變性的肝細(xì)胞也可見陽性染色； ED2表達(dá)在正常對照組沿肝血竇少量散在分布，纖維化模型組陽性信號明顯增多，主要分布在增生的纖維組織及纖維間隔，在肝實(shí)質(zhì)內(nèi)也有少量分布，陽性信號隨著實(shí)驗(yàn)的進(jìn)程呈遞增趨勢，且陽性細(xì)胞胞漿豐富、體積變大，外形為星形、多角形和不規(guī)則形。 PDTC組與模型組相比較：(1)血漿內(nèi)毒素含從第2周末起，顯著高于同期模型組，第4周達(dá)

5、到最高值(P＜0.05)，第6周末開始回降，但仍顯著高于正常對照組(P＜0.05)，與同期模型組無顯著性差異；(2)肝組織NF-κBp65和CTGF表達(dá)顯著低于同期纖維化模型組(P＜0.05)，且二者呈正相關(guān)(r=0.815，P＜0.01)；(3)PDTC組血漿內(nèi)毒素含量與NF-κBp65和CTGF表達(dá)均無相關(guān)性；(4)ED2表達(dá)也明顯減少。 [結(jié)論] 1．內(nèi)毒素可能通過激活NF-κB通路上調(diào)CTGF的表達(dá)，從而加速肝纖

6、維化的發(fā)生和發(fā)展。 2．內(nèi)毒素可能通過NF-κB活化枯否氏細(xì)胞，從而參與肝纖維化的發(fā)生和發(fā)展。 3．PDTC有明顯的抗肝纖維化作用。 [目的]觀察水飛薊賓(Silybinin)在大鼠實(shí)驗(yàn)性肝纖維化過程中抗肝維化作用及其可能的機(jī)制。 [方法]雌性Wistar大鼠70只，隨機(jī)分為正常對照組(n=5)、肝纖維化模型組(n=33)和水飛薊賓治療組(n=32)，后兩組各自再隨機(jī)分為1周、2周、4周、6周組(n為6～

7、11)。肝纖維化模型組以40％CCl4造成化學(xué)性肝損傷；水飛薊賓治療組注射40％CCl4的同時(shí)以水飛薊賓50 mg/kg/d灌胃。各組動物(也包括正常對照組)按設(shè)計(jì)分別于給藥后1周、2周、4周、6周末模型形成后，在乙醚麻醉、無菌無熱源條件下，行腹主動采血和肝組織取材進(jìn)行病理學(xué)觀察。用Western-blot和原位雜交方法檢測各組肝臟結(jié)締組織生長因子(CTGF)的表達(dá)；測定各組血漿內(nèi)毒素(ET)含量，同時(shí)也測定羥脯氨酸(Hyp)、丙二醛(