慢性特發(fā)性血小板減少性紫癜患者脾臟病理學(xué)研究.pdf

1、通過(guò)光鏡觀察、形態(tài)學(xué)計(jì)量研究CITP患者脾臟的病理形態(tài)學(xué)變化與切脾療效的關(guān)系。通過(guò)免疫組化和電鏡觀察CITP中樹(shù)突狀細(xì)胞(DC)的數(shù)量、分布和形態(tài)的變化。通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)方法研究探討DC在ITP免疫學(xué)發(fā)病機(jī)制中的作用。通過(guò)PCR檢測(cè)脾臟邊緣區(qū)增寬患者脾臟B、T細(xì)胞基因重排情況，探究此類患者的鑒別診斷。結(jié)果我們發(fā)現(xiàn)CITP患者脾臟濾泡平均最長(zhǎng)直徑≥500μm和等圓直徑≥400μm是切脾預(yù)后療效好的形態(tài)學(xué)指標(biāo)。 第一部分慢性特發(fā)性血小板

2、減少性紫癜患者脾臟病理形態(tài)學(xué)變化與切脾預(yù)后關(guān)系的研究 目的：探討慢性特發(fā)性血小板減少性紫癜的脾臟病理形態(tài)學(xué)參數(shù)變化與切脾后患者臨床預(yù)后的關(guān)系。 方法：178例慢性特發(fā)性血小板減少性紫癜患者脾臟和35例因外傷切除的對(duì)照脾臟做常規(guī)石蠟切片，HE染色光鏡觀察，并用病理圖像分析軟件對(duì)所有患者脾臟組織切片單位面積的濾泡總量，次級(jí)濾泡數(shù)量，濾泡平均最長(zhǎng)直徑、等圓直徑，次級(jí)濾泡的生發(fā)中心、套區(qū)、邊緣區(qū)的面積進(jìn)行測(cè)量分析。5例ITP脾臟

3、做了常規(guī)透射電鏡觀察。根據(jù)術(shù)后兩周及一年的血小板數(shù)療效標(biāo)準(zhǔn)將ITP患者分為近期有效組，近期無(wú)效組，遠(yuǎn)期有效組，遠(yuǎn)期無(wú)效組。 結(jié)果：ITP患者年齡和脾臟重量在有效組、無(wú)效組間無(wú)顯著差異(P>0.05)，表明年齡與脾臟重量不能判斷切脾后療效。ITP患者單位面積脾臟組織的濾泡總量，次級(jí)濾泡數(shù)量在有效組和無(wú)效組間無(wú)顯著差異(P>0.05)，表明CITP濾泡數(shù)量不能作為判斷療效的指標(biāo)。次級(jí)濾泡邊緣區(qū)面積在ITP患者近期有效組和無(wú)效組及正常

4、對(duì)照組間差異顯著(P<0.05)，說(shuō)明次級(jí)濾泡邊緣區(qū)面積可作為判斷近期療效的形態(tài)指標(biāo)。在ITP患者近期或遠(yuǎn)期有效組和無(wú)效組之間次級(jí)濾泡套區(qū)和生發(fā)中心面積均無(wú)顯著差異(P>0.05)，表明CITP脾臟次級(jí)濾泡的套區(qū)、生發(fā)中心的面積大小不能作為判斷切脾療效的形態(tài)指標(biāo)。CITP患者脾臟濾泡平均最長(zhǎng)直徑≥500μ m和等圓直徑≥400μm在有效組和無(wú)效組以及正常對(duì)照組間差異顯著(P<0.05)，表明CITP患者脾臟濾泡平均最長(zhǎng)直徑和等圓直徑能較

5、好地判斷切脾治療的效果。47％的病例可見(jiàn)明顯次級(jí)淋巴濾泡增多或增大。10.7％的病例可見(jiàn)脾濾泡邊緣區(qū)增寬。電鏡下可見(jiàn)大量吞噬細(xì)胞的殘留血小板物質(zhì)及脾竇血管內(nèi)皮細(xì)胞“腺管樣”排列。 結(jié)論：CITP患者脾臟濾泡平均最長(zhǎng)直徑≥500μm和等圓直徑≥400μm是切脾療效好的指標(biāo)，尤其次級(jí)濾泡邊緣區(qū)面積增寬可作為近期療效好的形態(tài)指標(biāo)?；颊吣挲g與脾臟重量、脾臟單位面積的濾泡總量和次級(jí)濾泡數(shù)量對(duì)判斷切脾的療效無(wú)意義。 第二部分慢性特發(fā)

6、性血小板減少性紫癜患者脾臟樹(shù)突狀細(xì)胞病理特征的研究 目的：比較樹(shù)突狀細(xì)胞(DC)在正常對(duì)照和慢性特發(fā)性血小板減少性紫癜患者脾臟組織的的形態(tài)和分布，探討DC在ITP中的病理發(fā)生學(xué)機(jī)制。 方法：用免疫組化SPA檢測(cè)20例ITP患者和20例正常脾臟組織中S-100蛋白、CD1a、CD21的分布表達(dá)情況；取20例ITP患者新鮮脾臟標(biāo)本、5例正常外傷脾臟切除標(biāo)本，研磨做成細(xì)胞懸液，取其中的單個(gè)核細(xì)胞做細(xì)胞點(diǎn)片，免疫組化SPA法檢測(cè)

7、S-100蛋白、CD1a、CD21陽(yáng)性細(xì)胞的數(shù)量。取陽(yáng)性細(xì)胞染色良好區(qū)域計(jì)數(shù)500個(gè)單個(gè)核細(xì)胞，計(jì)數(shù)陽(yáng)性細(xì)胞的比例。5例ITP患者脾臟作常規(guī)透射電鏡DC的超微結(jié)構(gòu)。 結(jié)果：CD21濾泡樹(shù)突狀細(xì)胞陽(yáng)性，陽(yáng)性細(xì)胞有較長(zhǎng)的突起，交錯(cuò)成篩網(wǎng)狀在脾臟濾泡分布，主要位于生發(fā)中心內(nèi)。S-100蛋白、CD1a并指樹(shù)突狀細(xì)胞陽(yáng)性，陽(yáng)性細(xì)胞突起長(zhǎng)短不一，散在分布于脾臟動(dòng)脈周圍淋巴鞘的T細(xì)胞區(qū)。ITP患者和正常脾臟中三種抗體的陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)均無(wú)顯著差異(

8、P>0．05)。電鏡下DC有更豐富的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)。 結(jié)論： CITP時(shí)脾臟中的DC分布和數(shù)量無(wú)明顯變化，超微結(jié)構(gòu)提示可能有功能增強(qiáng)的表現(xiàn)。 第三部分慢性特發(fā)性血小板減少性紫癜患者脾臟樹(shù)突狀細(xì)胞的功能研究嘗試 目的：探討從人脾臟組織培養(yǎng)DC的方法，嘗試了解DC細(xì)胞在ITP有無(wú)功能的變化。 方法：提取6例ITP患者和1例正常外傷切脾新鮮脾臟中的單個(gè)核細(xì)胞，無(wú)菌培養(yǎng)，觀察細(xì)胞的形態(tài)變化。 結(jié)果：培養(yǎng)三天時(shí)就細(xì)

9、胞出現(xiàn)突起結(jié)構(gòu)，懸浮時(shí)呈毛刺裝，貼壁即看到明顯的樹(shù)突結(jié)構(gòu)，五至七天細(xì)胞漸漸聚集在一起，成團(tuán)現(xiàn)象明顯增多。 第四部分慢性特發(fā)性血小板減少性紫癜邊緣區(qū)增寬患者脾臟PCR的探討 目的：了解ITP邊緣區(qū)增寬的脾臟是否存在異?？寺?。 方法：用常規(guī)PCR法檢測(cè)3例ITP邊緣區(qū)增寬的脾臟的IgH和TCR γ基因重排的表達(dá)。 結(jié)果：兩位患者有IgH基因重排，并屬于CITP患者脾臟濾泡平均最長(zhǎng)直徑≥500μm和等圓直徑≥4