胃癌細(xì)胞表面MAL識(shí)別的特異性糖蛋白糖鏈結(jié)構(gòu)表達(dá)與胃癌轉(zhuǎn)移相關(guān)性研究.pdf

1、研究背景及目的：細(xì)胞癌變過(guò)程中常伴有細(xì)胞膜表面糖蛋白N-糖鏈結(jié)構(gòu)的異常改變，其中腫瘤細(xì)胞表面唾液酸化水平增加與腫瘤的惡性進(jìn)展及早期轉(zhuǎn)移有密切聯(lián)系。有關(guān)唾液酸在人胃癌細(xì)胞表面表達(dá)的特異性及其臨床意義的研究，國(guó)內(nèi)外相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道較少。唾液酸在胃癌細(xì)胞表面的表達(dá)與胃癌侵襲、轉(zhuǎn)移潛能之間的相關(guān)性，尚有待于進(jìn)一步研究與探討。本研究利用能夠特異性識(shí)別、結(jié)合NeuAcα2，3Galβ1，4GlcNAc/Glc唾液酸結(jié)構(gòu)的朝鮮槐凝集素（Maackia a

2、murensis leukoagg lutinin，MAL），檢測(cè)α2，3唾液酸在100例胃癌組織及其轉(zhuǎn)移性淋巴結(jié)以及大腸癌組織中的表達(dá)，通過(guò)對(duì)比分析，闡明α2，3唾液酸在胃癌組織中表達(dá)的特異性及與胃癌患者臨床病理因素之間的相關(guān)性；通過(guò)對(duì)不同胃癌細(xì)胞（SGC-7901，BGC-823，MKN-28）及正常胃粘膜細(xì)胞（GES-1）表面α2，3唾液酸含量的檢測(cè)并結(jié)合體外細(xì)胞粘附實(shí)驗(yàn)、重組基底膜侵襲和轉(zhuǎn)移實(shí)驗(yàn)，進(jìn)一步明確α2，3唾液酸在胃癌細(xì)

3、胞表面表達(dá)的特異性及與細(xì)胞侵襲、遷移潛能之間的相關(guān)性。 實(shí)驗(yàn)方法：（1）以MAL組織化學(xué)染色法檢測(cè)α2，3唾液酸在100例胃癌組織（53例伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移）及其轉(zhuǎn)移性淋巴結(jié)和40例大腸癌組織（20例結(jié)腸癌，20例直腸癌）中的表達(dá)，通過(guò)對(duì)比分析，研究該糖鏈結(jié)構(gòu)在胃癌組織中表達(dá)的特異性。計(jì)算MAL陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)，探討α2，3唾液酸在胃癌組織中的表達(dá)與胃癌患者臨床病理因素之間的相關(guān)性。（2）分別以MAL細(xì)胞化學(xué)染色法和流式細(xì)胞術(shù)觀察和檢測(cè)α

4、2，3唾液酸在不同胃癌細(xì)胞及正常胃粘膜細(xì)胞表面的表達(dá)，進(jìn)一步明確α2，3唾液酸在胃癌細(xì)胞表面表達(dá)的特異性。（3）以體外細(xì)胞粘附試驗(yàn)分析α2，3唾液酸在不同胃癌細(xì)胞表面的表達(dá)與細(xì)胞-細(xì)胞外基質(zhì)（extracellular matrix，ECM）粘附能力之間的相關(guān)性。（4）以重組基底膜侵襲、轉(zhuǎn)移試驗(yàn)探討α2，3唾液酸在不同胃癌細(xì)胞表面的表達(dá)與細(xì)胞侵襲、遷移潛能之間的相關(guān)性。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果：MAL組織化學(xué)染色結(jié)果顯示，100例胃癌組織及5

5、3例胃癌轉(zhuǎn)移性淋巴結(jié)均呈現(xiàn)不同程度的MAL陽(yáng)性染色，且在胃癌組織中，MAL僅對(duì)胃癌細(xì)胞表面糖鏈結(jié)構(gòu)有結(jié)合反應(yīng)，而癌旁正常胃粘膜細(xì)胞表面無(wú)MAL陽(yáng)性染色，提示胃癌細(xì)胞表面存在MAL特異性識(shí)別、結(jié)合的α2，3唾液酸結(jié)構(gòu)NeuAcα2，3Galβ1，4 GlcNAc/Glc。此外，α2，3唾液酸在胃癌組織中的表達(dá)與胃癌的侵襲深度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有顯著的相關(guān)性，在T3/T4階段的胃癌組織中顯著高于T1/T2階段（P=0．0003）；在轉(zhuǎn)移性胃癌組織

6、中的表達(dá)顯著高于未轉(zhuǎn)移的胃癌組織（P=0．0441）。并且，α2，3唾液酸在53例胃癌轉(zhuǎn)移性淋巴結(jié)中表現(xiàn)出比原發(fā)灶更高的陽(yáng)性表達(dá)（P=0．0283）。在與大腸癌的對(duì)比研究中發(fā)現(xiàn)，在40例大腸癌組織中，MAL在癌組織及非癌組織內(nèi)均呈現(xiàn)陽(yáng)性染色，正常組織與癌組織的染色界限并不十分明顯，提示與胃癌組織相比較，α2，3唾液酸糖鏈結(jié)構(gòu)在大腸癌組織中的表達(dá)是非特異性的。 MAL細(xì)胞化學(xué)染色結(jié)果顯示，α2，3唾液酸在不同胃癌細(xì)胞表面具有不同

7、程度的表達(dá)。其中，MAL在高轉(zhuǎn)移胃癌細(xì)胞SGC-7901表面陽(yáng)性率最高（95．6％），其次為BGC-823（79．8％），在高分化胃癌細(xì)胞MKN-28表面陽(yáng)性率為58．9％，而在正常胃粘膜細(xì)胞GES-1表面陽(yáng)性率僅為32．8％。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果與MAL細(xì)胞化學(xué)染色結(jié)果一致，高轉(zhuǎn)移胃癌細(xì)胞SGC-7901表面MAL陽(yáng)性率最高（89．24％），其次分別為BGC-823（73．10％）和MKN-28（55．54％），而在正常胃粘膜細(xì)胞GES

8、-1表面陽(yáng)性率僅為18．18％。體外細(xì)胞粘附試驗(yàn)顯示，SGC-7901、BGC-823和MKN-28粘附細(xì)胞的平均光密度值分別為0．35±0．017，0．14±0．004，0．10±0．013，其中細(xì)胞表面α2，3唾液酸表達(dá)最高的SGC-7901表現(xiàn)出更強(qiáng)的與ECM的粘附能力，三者之間的差異有顯著性（SGC-7901 vs BGC-823，P<0．001；SGC-7901 vs BGC-823，P<0．001；BGC-823 vs MK

9、N-28，P=0．004）。重組基底膜侵襲、轉(zhuǎn)移試驗(yàn)，SGC-7901、BGC-823和MKN-28穿過(guò)Transwell小室的細(xì)胞數(shù)量分別為34．3±5．2，16．7±1．1，4．7±1．5，其中細(xì)胞表面α2，3唾液酸含量最高的SGC-7901表現(xiàn)出更強(qiáng)的侵襲與遷移能力，三者之間有顯著性差異（SGC-7901 vs BGC-823，P<0．001；SGC-7901vs MKN-28，P<0．001；BGC-823 vs MKN-28，