Pichia anomala 0732-1發(fā)酵培養(yǎng)基的優(yōu)化及其抑菌成分的研究.pdf

1、背景：瓜類(lèi)細(xì)菌性果斑病是哈密瓜生產(chǎn)中一種毀滅性病害，也是國(guó)內(nèi)外重大檢疫性植物病害。本試驗(yàn)研究對(duì)象 P. anomala0732-1能代謝產(chǎn)生對(duì)哈密瓜果斑病病原菌燕麥?zhǔn)人峋鞴蟻喎N（Acidovora avenae subsp. citrulli）有較好抑制作用的物質(zhì)，簡(jiǎn)稱(chēng)ABS。
　　目的：通過(guò)對(duì)P. anomala0732-1產(chǎn)ABS發(fā)酵培養(yǎng)基的優(yōu)化、抑細(xì)菌物質(zhì)（ABS）成分分析、ABS誘導(dǎo)寄主抗性測(cè)定、添加佐劑對(duì) P. ano

2、mala0732-1抑菌效果影響4個(gè)方面進(jìn)行研究，以期為P. anomala0732-1有效防治哈密瓜細(xì)菌性果斑病提供理論和實(shí)踐依據(jù)。
　　方法：采用單因子篩選和響應(yīng)面試驗(yàn)設(shè)計(jì)優(yōu)化產(chǎn)ABS的發(fā)酵培養(yǎng)基；利用核磁共振（NMR）、氣相色譜-質(zhì)譜連用（GC-MS）和高效液相色譜（HPLC）分析ABS成分及抑菌活性；通過(guò)哈密瓜葉片噴霧接種P. anomola0732-1的發(fā)酵液，分時(shí)段連續(xù)測(cè)定葉片組織內(nèi)SOD、POD、PPO和PAL酶活變

3、化，驗(yàn)證P. anomola0732-1誘導(dǎo)寄主抗性的生防類(lèi)型；分別利用平板抑菌圈法和幼果活體試驗(yàn)測(cè)定氯化鈣、2-脫氧-D-葡萄糖和茉莉酮酸甲酯對(duì)P. anomola0732-1抑菌效果的影響。
　　結(jié)果：采用單因子、PB和響應(yīng)面試驗(yàn)設(shè)計(jì)獲得P. anomala0732-1產(chǎn)ABS最優(yōu)培養(yǎng)基：蔗糖為41.2 g、酵母浸膏1.39 g、MgSO41.59 g、蛋白胨5 g、KH2PO41.25 g和H2O1000 mL。通過(guò)對(duì)ABS

4、成分分析，ABS含有1.1±0.1％乙酸、0.043±0.003%琥珀酸、0.033±0.003%檸檬酸、0.033±0.003%蘋(píng)果酸、0.031±0.004%乳酸和0.011±0.001%丙酸。乙酸含量最多，抑菌作用較強(qiáng)。添加佐劑2.5%（w/v）氯化鈣（CaCl2）、36 mM2-脫氧-D-葡萄糖（2 DOG）、200μM茉莉酮酸甲酯（MeJA）能顯著增強(qiáng)P. anomala0732-1對(duì)病原菌Aac的抑制效果，其中CaCl2和M

5、eJA對(duì)P.anomala0732-1生長(zhǎng)無(wú)影響。在幼果活體試驗(yàn)中，2.5%（w/v）的CaCl2和200μM的MeJA與P. anomala0732-1共同作用時(shí)顯著抑制了細(xì)菌性果斑病病斑的擴(kuò)展。噴布P. anomola0732-1發(fā)酵液在156 h內(nèi)均能不同程度誘導(dǎo)哈密瓜葉片抗性酶的增強(qiáng)，其中POD酶活表達(dá)最強(qiáng)，在接種發(fā)酵液60 h達(dá)到酶活峰值為432.86（U/g）是對(duì)照組的1.8倍。
　　結(jié)論：通過(guò)響應(yīng)面試驗(yàn)設(shè)計(jì)優(yōu)化P.

6、anomola0732-1發(fā)酵培養(yǎng)基，代謝ABS抑細(xì)菌活性提高45.29%。采用不同物質(zhì)分析檢測(cè)結(jié)果確定出ABS的主要成分為有機(jī)酸類(lèi)物質(zhì)，是抑制病原細(xì)菌生長(zhǎng)的主要物質(zhì)。接種P. anomola0732-1發(fā)酵液在一定接種時(shí)間內(nèi)相比CK和Aac能誘導(dǎo)哈密瓜幼苗抗性相關(guān)酶PAL、SOD、PPO、POD活性的提高，證明了P. anomola0732-1在誘導(dǎo)哈密瓜苗抗性方面具有一定的作用。向P. anomala0732-1發(fā)酵液中添加佐劑Ca