針刺百會(huì)和足三里穴對(duì)腦缺血再灌注損傷大鼠炎癥機(jī)制的研究.pdf

1、研究目的
　　 在前期研究基礎(chǔ)上，采用大腦中動(dòng)脈線栓法制備腦缺血再灌注損傷(cerebral ischemia reperfusion injury，CIRI)大鼠模型，檢測(cè)中樞雙側(cè)相關(guān)腦區(qū)炎癥損傷信號(hào)鏈中的炎性細(xì)胞因子白細(xì)胞介素(IL)-1β、IL-6和腫瘤壞死因子(TNF)-α及外周血中的IL-1β、IL-6、TNF-α和損傷應(yīng)激信號(hào)熱休克蛋白(HSP)70表達(dá)的變化，探討針刺百會(huì)和足三里穴對(duì)腦缺血再灌注損傷炎癥機(jī)制的干預(yù)作

2、用。
　　 實(shí)驗(yàn)方法
　　 大鼠隨機(jī)分為針刺組、模型組和假手術(shù)組，每組再根據(jù)再灌注后時(shí)間分成12h、24h、48h、72h、96h和144h6個(gè)時(shí)間點(diǎn)，每個(gè)時(shí)間點(diǎn)8只大鼠，另設(shè)正常對(duì)照組大鼠8只；以右側(cè)大腦中動(dòng)脈線栓法制備腦缺血再灌注損傷模型，針刺組為造模成功后在規(guī)定時(shí)間內(nèi)針刺百會(huì)和足三里穴。
　　 分別應(yīng)用TTC染色法驗(yàn)證模型及提供實(shí)驗(yàn)定位標(biāo)記，應(yīng)用HE染色觀察細(xì)胞的形態(tài)類(lèi)型；應(yīng)用免疫組織化學(xué)技術(shù)和酶聯(lián)免疫吸附

3、測(cè)定法(ELISA)分析中樞雙側(cè)腦區(qū)及外周血中炎性細(xì)胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α和損傷應(yīng)激蛋白HSP70表達(dá)的變化。
　　 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
　　 1．TTC染色：腦組織大腦中動(dòng)脈供血區(qū)域，可見(jiàn)到白色的梗死灶，與鮮紅色的正常腦組織形成對(duì)比；且視交叉前后的腦片梗死灶較穩(wěn)定。這為我們下一步研究腦缺血中樞炎癥機(jī)制提供較好的實(shí)驗(yàn)定位標(biāo)記。
　　 2.HE染色：損傷核心區(qū)的病理?yè)p傷高峰時(shí)間出現(xiàn)在腦缺血后48h，72h后水

4、腫減輕，膠質(zhì)細(xì)胞和膠原纖維增生，大量新生血管出現(xiàn)，96h最為明顯。
　　 3．ELISA結(jié)果分析：
　　 1)IL-1β在腦缺血模型組大鼠外周血清中呈雙峰形表達(dá)，峰值時(shí)間為24h和96h;在針刺組大鼠各個(gè)時(shí)間點(diǎn)外周血清中表達(dá)下調(diào)，以24h組最顯著；在假手術(shù)組24h組最高。
　　 2)IL-6在各組大鼠外周血清中表達(dá)顯示：假手術(shù)組呈雙峰形表達(dá)，峰值時(shí)間在24h和72h;模型組的表達(dá)高于正常對(duì)照組；針刺組呈單谷型分布

5、，谷值時(shí)間為48h，且針刺組表達(dá)低于模型組和假手術(shù)組；各組大鼠外周血清IL-6的表達(dá)均高于正常對(duì)照組。
　　 3)TNF-α在各組大鼠外周血清中均呈單峰形表達(dá)，模型組和針刺組的峰值時(shí)間均為24h，但針刺組各個(gè)時(shí)間點(diǎn)表達(dá)低于模型組；各組的TNF-α表達(dá)均高于正常對(duì)照組。
　　 4)HSP70在各組大鼠外周血清中的表達(dá)均較正常組高，模型組及假手術(shù)組峰值時(shí)間均為12h;針刺組表達(dá)的峰值時(shí)間在24h，72h后表達(dá)降至基線水平，且

6、表達(dá)量低于模型組和假手術(shù)組。
　　 4．免疫組化染色：
　　 1)IL-1β在腦缺血大鼠患側(cè)缺血腦區(qū)呈雙峰表達(dá)，模型組峰值時(shí)間為48h和96h，針刺組為24h和72h，且針刺組表達(dá)量顯著低于模型組，但高于假手術(shù)組和正常對(duì)照組；健側(cè)非缺血腦區(qū)的表達(dá)高于正常對(duì)照組和假手術(shù)組。
　　 2)IL-6在患側(cè)缺血腦區(qū)呈單峰表達(dá)，模型組峰值時(shí)間為96h，針刺組為72h，針刺組表達(dá)量顯著低于模型組，但高于假手術(shù)組和正常對(duì)照組；健

7、側(cè)腦區(qū)IL-6表達(dá)高于正常對(duì)照組和假手術(shù)組。
　　 3)TNF-α在患側(cè)缺血腦區(qū)呈單峰表達(dá)，模型組和針刺組峰值時(shí)間均為72h，針刺組表達(dá)量顯著低于模型組，但高于假手術(shù)組和正常對(duì)照組；健側(cè)非缺血腦區(qū)的表達(dá)均低于患側(cè)缺血腦區(qū)，但高于正常對(duì)照組和假手術(shù)組。
　　 結(jié)論
　　 1．針刺百會(huì)和足三里穴可抑制中樞損傷腦區(qū)損傷相關(guān)的炎性細(xì)胞因子表達(dá)，促進(jìn)損傷-修復(fù)相關(guān)的細(xì)胞因子表達(dá)，使修復(fù)時(shí)相前移，加速損傷修復(fù)。
　　

8、 2．針刺百會(huì)和足三里穴對(duì)機(jī)體宏觀生理功能調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)的影響可能是通過(guò)對(duì)損傷對(duì)側(cè)和全身的功能調(diào)節(jié)，降低免疫系統(tǒng)對(duì)中樞局部腦組織損傷的炎癥應(yīng)答，促進(jìn)損傷修復(fù)信號(hào)鏈活化。
　　 創(chuàng)新點(diǎn)
　　 以線栓法制備經(jīng)典的腦缺血再灌注損傷大鼠模型，根據(jù)再灌注后時(shí)間分別取12h、24h、48h、72h、96h和144h6個(gè)時(shí)間點(diǎn)，探討針刺百會(huì)、足三里穴對(duì)腦缺血再灌注損傷大鼠中樞雙側(cè)腦區(qū)炎性細(xì)胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α的表達(dá)，及外周