嗜鹽α-淀粉酶的鑒定及其與嗜鹽相關(guān)的氨基酸殘基研究.pdf

1、嗜鹽α-淀粉酶具有獨(dú)特的鹽適應(yīng)機(jī)制，使其在各種高鹽等極端環(huán)境中，依然能夠高效、穩(wěn)定地行使其生物催化能力，在精密化工、水產(chǎn)、食品及其診斷試劑等眾多行業(yè)中，都具有廣闊的應(yīng)用前景。目前，雖然嗜鹽酶的相關(guān)研究已經(jīng)成為一個(gè)熱點(diǎn)，但是目前嗜鹽酶的鹽適應(yīng)性機(jī)理還處于假說階段，還不能完全解釋嗜鹽酶的嗜鹽分子機(jī)理，因此繼續(xù)嗜鹽酶的相關(guān)研究，對(duì)探索其嗜鹽的本質(zhì)就顯得尤為重要。
　　從非嗜鹽的大腸桿菌JM109中克隆到一個(gè)嗜鹽α-淀粉酶基因并重組表達(dá)。

2、通過蛋白比對(duì)、同源建模，確定Na+結(jié)合位點(diǎn)上的氨基酸殘基，并對(duì)相應(yīng)位點(diǎn)進(jìn)行定點(diǎn)突變，以此來初步探索嗜鹽淀粉酶的嗜鹽特性和機(jī)理。突變酶的酶學(xué)性質(zhì)研究結(jié)果表明，相對(duì)于野生酶而言，突變酶K6-N204D和K6-P368G更加嗜鹽，其最適NaCl濃度由野生酶的2 mol/L增加到3 mol/L，具有更好的嗜鹽性，最適pH均為7.0，最適溫度分別為55℃、50℃，比活力分別為18200 U/mg和4831U/mg。此外突變酶K6-N204D和K6

3、-P368G在無NaCl情況下，也顯示出了酶活，雖然其比活偏低僅為30 U/mg和130 U/mg，但是相對(duì)于野生酶K6而言，已是很大的改變。而K6-R208D-N209H-A211E三點(diǎn)連續(xù)突變后，其蛋白酶在有無NaCl情況下，均不顯示出酶活。
　　與此同時(shí)，本文還從同樣屬于非嗜鹽菌的根癌農(nóng)桿菌EHA1252中獲得一個(gè)嗜鹽α-淀粉酶基因，經(jīng)表達(dá)純化，研究其相關(guān)的酶學(xué)性質(zhì)，測(cè)定結(jié)果顯示，其最適NaCl濃度達(dá)到近飽和的5.5 mol