精索靜脈曲張對青春期大鼠睪丸生精細(xì)胞HIF-1α、VEGF、Bax表達(dá)的影響.pdf

1、目的：研究精索靜脈曲張(VC)對大鼠睪丸生精細(xì)胞HIF-1α、VEGF和Bax表達(dá)的影響，探索精索靜脈曲張引起不育的機(jī)理。 意義： 精索靜脈曲張是導(dǎo)致男性不育的重要原因之一，其中約1/3男性不育患者伴有精索靜脈曲張，但不是所有精索靜脈曲張患者都表現(xiàn)為精液異常，其中僅15％-20％的患者出現(xiàn)不育而其他患者依然可以生育這一現(xiàn)象目前沒有合理的解釋，有待于對其病理生理機(jī)制的進(jìn)一步研究。近年來對精索靜脈曲張的不育機(jī)制提出了許多假設(shè)

2、，睪丸缺氧被認(rèn)為是精索靜脈曲張導(dǎo)致睪丸病理損害的原因之一，我們通過建立精索靜脈曲張動物模型，測定缺氧標(biāo)志物HIF-1α的表達(dá)，研究精索靜脈曲張睪丸曲細(xì)精管內(nèi)生精細(xì)胞是否存在低氧，同時測定VEGF和Bax的表達(dá)以研究與缺氧相關(guān)的病理生理事件如血管誘導(dǎo)和凋亡等，探討VC不育的機(jī)制。 方法： 1．精索靜脈曲張大鼠模型的建立：成年雄性Wistar大鼠(7周齡，體重180-220克)48只，隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組和假手術(shù)組(對照組)共6組

3、，分別為30天組、60天組、90天組，其中相對應(yīng)的30天、60天、90天模型中，假手術(shù)組(SOG)和實(shí)驗(yàn)組(VG)分別每組8只。VG 組大鼠部分結(jié)扎左腎靜脈，復(fù)制精索靜脈曲張模型；假手術(shù)組只行左腎靜脈分離不結(jié)扎。 2．免疫組化檢測HIF-1α、VEGF和Bax的表達(dá)：分別于術(shù)后30天、60天，90天處死實(shí)驗(yàn)組和假手術(shù)組大鼠，取出左側(cè)睪丸，電子天平分別稱其重量，用帶目鏡測微器的手術(shù)顯微鏡測量蔓狀靜脈與精索靜脈之間的靜脈直徑，用Bo

4、win固定液固定后進(jìn)行石蠟包埋，切片后行免疫組化檢測HIF-1α、VEGF和Bax的表達(dá)和HE染色觀察病理學(xué)改變。陽性表達(dá)結(jié)果以平均光密度(OD)作為測定指標(biāo)。 結(jié)果： 1．HE染色結(jié)果：VG組睪丸組織結(jié)構(gòu)損害呈局灶性或彌漫性，以局灶性為多。表現(xiàn)為生精上皮細(xì)胞排列紊亂，廣泛脫落，伴有炎性表現(xiàn)和精子減少；假手術(shù)組則表現(xiàn)為曲細(xì)精管內(nèi)各級生精細(xì)胞排列有序，形態(tài)正常，無明顯的病理改變。 2．VG組和SOG組大鼠左側(cè)睪丸重

5、量和左側(cè)精索靜脈直徑比較：比較VG組與SOG組的左側(cè)睪丸重量和左側(cè)精索靜脈直徑有顯著性差異(P<0.05)，VG組的左側(cè)睪丸重量明顯減輕、左側(cè)精索靜脈擴(kuò)張；比較曲張組各組之間的左側(cè)睪丸重量以及各組問的左側(cè)精索靜脈直徑差異有顯著性(P<0.05)，隨著建模時間延長，VG組左側(cè)睪丸重量減輕，左側(cè)精索靜脈擴(kuò)張程度加重。 3.免疫組化觀察HIF-1α的表達(dá)情況：HIF-1α表達(dá)主要見于生精細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)，以精母細(xì)胞明顯，也見于曲細(xì)精管外周

6、膜細(xì)胞的胞核。比較SOG各組間HIF-1α的表達(dá)無顯著性差異(P>0.05)；VG 各組間的表達(dá)存在明顯差異(P<0.01)；分別將VG和SOG組在30天、60天、90天的HIF-1α表達(dá)作平行比較，二者在30天和60天的表達(dá)存在明顯差異(P<0.01)，90天的表達(dá)無顯著性差異(P>0.05)。 4．免疫組化觀察VEGF 的表達(dá)情況：VEGF的表達(dá)主要見于生精細(xì)胞的胞質(zhì)。比較SOG各組間VEGF的表達(dá)無顯著性差異(P>0.05

7、)；VG各組間的VEGF表達(dá)存在明顯差異(P<0.05)；分別將VG和SOG組在30天、60天、90天的VEGF表達(dá)作平行比較，二者在30天和90天的表達(dá)存在明顯差異(P<0.05)，60天的表達(dá)無顯著性差異(P>0.05)。 5．免疫組化觀察B觚的表達(dá)情況：Bax 表達(dá)見于生精細(xì)胞的胞質(zhì)和胞核，以精母細(xì)胞為主。比較SOG各組間Bax的表達(dá)無顯著性差異(P>0.05)；VG各組間Bax的表達(dá)存在明顯差異(P<0.01)；分別將V

8、G組和SOG組在30天、60天、90天的Bax表達(dá)作平行比較存在明顯差異(P<0.01)。 結(jié)論： 1．所建立大鼠精索靜脈曲張模型的睪丸組織中存在HIF-1α的表達(dá)，為VC的低氧學(xué)說提供了客觀的證據(jù)。 2．隨著建模時間延長，HIF-1α和VEGF的表達(dá)量降低，二者呈正相關(guān)，提示二者可能參與VC的保護(hù)機(jī)制。 3．Bax在VG組不同時期的表達(dá)均高于SOG組，隨著建模時間延長，Bax的表達(dá)增加，提示VC可促進(jìn)睪