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1、庫爾勒香梨原產(chǎn)庫爾勒地區(qū),栽培時(shí)間久遠(yuǎn),具有品質(zhì)優(yōu)良、皮薄肉脆、汁豐味甜、香味濃郁、極耐儲(chǔ)藏的優(yōu)點(diǎn),庫爾勒香梨的品質(zhì)優(yōu)良,近年來庫爾勒香梨已經(jīng)遠(yuǎn)銷國內(nèi)外,成為庫爾勒地區(qū)主栽的經(jīng)濟(jì)作物之一。隨著分子生物技術(shù)的發(fā)展,運(yùn)用分子技術(shù)輔助果樹新品種的選育和鑒定已經(jīng)成為一種趨勢(shì)。本實(shí)驗(yàn)以庫爾勒香梨和2006-2009年期間從農(nóng)二師各大優(yōu)良庫爾勒香梨種植園選擇的脫萼型、豐產(chǎn)型、大果型優(yōu)良營養(yǎng)系為試材,運(yùn)用SCoT分子標(biāo)記方法,對(duì)實(shí)驗(yàn)材料進(jìn)行擴(kuò)增,并克
2、隆測(cè)序,找到優(yōu)良營養(yǎng)系與對(duì)照材料之間的堿基差異,并對(duì)優(yōu)良營養(yǎng)系進(jìn)行鑒定,為庫爾勒香梨的品種鑒定研究提供技術(shù)支持。
本研究主要內(nèi)容包括:⑴試劑盒法和改良SDS法適合提取庫爾勒香梨基因組DNA,而試劑盒法提取的庫爾勒香梨基因組DNA最適合SCoT分析。⑵SCoT-PCR擴(kuò)增程序和反應(yīng)體系如下:反應(yīng)程序:94℃預(yù)變性4 min;94℃45 s,50℃30 s,72℃1 min,循環(huán)30次;72℃8 min;16℃保存。擴(kuò)增產(chǎn)物用1.
3、2%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)。反應(yīng)體系:20μL體系中包含10×buffer with Mg2+2.5μL,dNTPs1.6mmol·L-1,引物10μmol·L-1,Taq酶1.5U,DNA模板25ng。⑶從篩選出的20個(gè)引物中隨機(jī)選擇2條引物對(duì)24份材料擴(kuò)增,用DNAMAN、Editseq、ORF Finder和NCBI-BLAST-tblastx對(duì)測(cè)序結(jié)果分析,結(jié)果表明擴(kuò)增獲得的序列與沙梨、金冠蘋果、草莓、碧桃、釀酒葡萄等相關(guān)基因同源性
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