溫郁金莖葉和黑紫橐吾抗腫瘤活性研究.pdf

1、目的：研究溫郁金地上莖葉和黑紫橐吾根及根莖抗腫瘤活性,探索其作為溫郁金根塊替代藥材以及天然抗腫瘤藥物的可行性. 方法：1.將干燥溫郁金莖葉粉碎,90﹪乙醇浸提,提取液合并減壓蒸發(fā),濃縮回收得到乙醇總浸膏,在乙醇浸膏中加入適量的蒸餾水,然后用石油醚萃取3次,將石油醚部位合并濃縮回收,得到石油醚浸膏;接著用氯仿萃取3次,萃取液濃縮回收得到氯仿浸膏;母液繼續(xù)用乙酸乙酯萃取3次并濃縮回收得到乙酸乙酯浸膏.最后萃取得到正丁醇浸膏,剩余水層

2、回收濃縮得到水層浸膏.體外培養(yǎng)喉癌細胞(Hep-2),用DMSO分別溶解上述乙醇、石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇和水層浸膏并配制濃度為20、40、80、160、320μg/ml,以5-fu為陽性對照,采用四甲基偶氮唑鹽比色分析法(MTT法)測定各實驗組對Hep-2細胞的抑制作用,SPSS軟件分析各實驗組數(shù)據(jù)有無統(tǒng)計學(xué)意義.2.將干燥黑紫橐吾根及根莖粉碎,稱取5.0kg,95﹪乙醇浸提,提取液合并減壓蒸發(fā),濃縮回收乙醇總提取物.在乙醇浸膏

3、中加入適量的蒸餾水,然后用石油醚萃取3次,將石油醚部位合并濃縮回收,得到石油醚浸膏;接著用乙酸乙酯萃取3次,萃取液濃縮回收得到乙酸乙酯浸膏;母液繼續(xù)用正丁醇萃取3次并濃縮回收得到正丁醇浸膏,剩余水層回收濃縮得到水層浸膏.將所得乙酸乙酯浸膏充分干燥至恒重,用氯仿-甲醇(50:0-0:1)以梯度反復(fù)進行硅膠柱層析,TLC檢測合并相同組分,將含有目標(biāo)化合物的浸膏經(jīng)硅膠H梯度洗脫,再經(jīng)Sephadex LH-20柱層析純化(甲醇洗脫),得到艾里

4、莫芬雙內(nèi)酯化合物,并用DMSO溶解,配制濃度為100、,33.3、11.1、3.7 μg/ml,以順鉑為陽性對照,采用MTT、法測定各實驗組對KB(口腔上皮癌)細胞和BEL-7404(人肝癌)細胞的抑制作用. 結(jié)果：1.溫郁金莖葉總提取物、石油醚提取物和5-fu陽性對照組明顯抑制Hep-2細胞的生長,其抑制腫瘤細胞活性在測定濃度范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的劑量依賴性,氯仿、正丁醇和水層提取物對Hep-2細胞具有較弱的抑制作用,在測定濃度范圍

5、內(nèi)也具有劑量依賴性;由抑制率-濃度圖可知,在相同濃度下,各實驗組抗腫瘤活性大致具有如下趨勢:總提取物>5-fu陽性對照>石油醚部位>氯仿部位>正丁醇部位>乙酸乙酯部位、水層部位,其中,總提取物、5-fu陽性對照和石油醚部位曲線在低濃度區(qū)有交叉,5-fu陽性對照和石油醚部位曲線在高濃度區(qū)有交叉,氯仿、正丁醇和水層部位曲線在低濃度區(qū)有交叉,正丁醇、乙酸乙酯和水層部位曲線在高濃度區(qū)有交叉. 2.黑紫橐吾中的艾里莫芬雙內(nèi)酯化合物對KB細胞的半數(shù)

6、抑制濃度IC<,50>值(抑制率為50﹪時相應(yīng)的濃度)為7.65×10<'-5>M,陽性對照順鉑的lC<,50>值為5.67×10<'-6>M,艾里莫芬雙內(nèi)酯化合物對BEL-7404細胞的半數(shù)抑制濃度IC<,50>值為1.44×10<'-4>M,陽性對照順鉑的IC<,50>值為1.50×10<'-5>M. 結(jié)論：1.溫郁金莖葉總提取物具有抗腫瘤活性,且活性高于作為陽性對照的5-fu:其石油醚部位含有較多組分,該部位也是抗腫瘤的主