巰嘌呤甲基轉(zhuǎn)移酶遺傳多態(tài)性及其對成人急淋白血病巰嘌呤化療耐受性的影響.pdf

1、目的：研究我國成人急性淋巴細(xì)胞白血病(acutelymphoblasticleukemia，ALL)患者及健康漢族人群巰嘌呤甲基轉(zhuǎn)移酶(thiopurinemethyltransferase，TPMT)基因多態(tài)性；建立一種簡易的HPLC方法檢測血紅細(xì)胞TPMT的活性，并研究了健康漢族成年人和成人ALL患者TPMT活性分布；通過檢測成人ALL患者6-巰基嘌呤(6-mercatopurine,6-MP)維持治療中TPMT活性和基因型，臨床觀

2、察藥物毒性并調(diào)整藥物劑量，分析該檢測對6-MP化療個體化的臨床意義。 方法：第一部分：從78例成人ALL患者和154例健康漢族人外周血提取白細(xì)胞基因組DNA，采用等位基因特異性PCR(AS-PCR)和PCR結(jié)合限制性片斷長度多態(tài)性(PCR-RFLP)技術(shù)對TPMT*2、TPMT*3A、TPMT*3B和TPMT*3C的等位基因頻率進(jìn)行分析。第二部分：以非放射性S-腺苷-L-甲硫氨酸(S-adenosyl-L-methionine，

3、SAM)為甲基供體，在體外紅細(xì)胞裂解液中完成TPMT催化下的6-MP向6-甲基巰基嘌呤(6-methylmercatopurine，6-MeMP)的甲基化轉(zhuǎn)變。孵育結(jié)束時，6-MeMP經(jīng)乙酸苯汞混和物抽提。采用高效液相色譜法分析。TPMT的活性用37℃時每小時每毫升紅細(xì)胞生成多少納摩爾的6-MeMP來表示。第三部分：通過第一、二部分建立的方法檢測20例成人ALL患者初診時和6-MP維持治療中TPMT活性和基因型，臨床觀察藥物毒性并調(diào)整藥

4、物劑量，分析TPMT遺傳多態(tài)性對成人急淋白血病巰嘌呤維持化療耐受性的影響。 結(jié)果：第一部分：在成人ALL患者和健康漢族人中僅檢測到6例TPMT*3C雜合子，沒有檢到TPMT*2、TPMT*3A和TPMT*3B。成人ALL患者TPMT總的突變型等位基因頻率(1.28％)與健康漢族人群(1.30％)相近。第二部分：HPLC方法測定6-MeMP線性范圍為20-1280μg·L-1(r=0.9995，n=7)，最低檢測濃度0.01mg·

5、L-1；高、中、低三種濃度的平均回收率為92.3％，日內(nèi)及日間變異均＜8％。健康漢族成人和成人ALL患者TPMT活性均呈正態(tài)分布，前者活性范圍為5.12～22.41units/mlpRBC，平均活性為(13.46±2.90)units/mlpRBC；后者活性范圍為8.13～20.86units/mlpRBC，平均活性為(13.31±2.55)units/mlpRBC。男性和女性相比，TPMT活性沒有顯著性差異。健康漢族成人與成人ALL患

6、者服用6-MP前TPMT活性相比沒有顯著性差異。而TPMT*3C雜合子TPMT平均活性低于野生型TPMT基因(TPMT*1)純合子，差異有顯著性。第三部分：20名成人ALL患者中有2例酶活性較低的TPMT*3C雜合子，未發(fā)現(xiàn)其它突變基因型。服用6-MP維持治療(2周后)的成人ALL患者TPMT活性(15.96±3.44units/mlpRBC)顯著高于初診時(13.20±2.96units/mlpRBC)。20名患者中有2人因?yàn)檠憾拘?/p>

7、和肝毒性不耐受標(biāo)準(zhǔn)劑量的6-MP維持治療。 結(jié)論：1.TPMT*3C可能是中國成人ALL和健康漢族人群最主要的突變型等位基因；2.TPMT活性在健康漢族成人和成人ALL患者均呈正態(tài)分布，TPMT基因型和表型存在相關(guān)性，TPMT*3C雜合子平均酶活性低于野生型TPMT基因(TPMT*1)純合子；3.成人ALL患者服用6-MP維持治療(2周后)TPMT活性高于初診時；在開始包含巰嘌呤類藥物的化療方案治療前，給予檢測TPMT基因型和活