貴州地方豬種促卵泡激素β亞基和雌激素受體基因結(jié)構(gòu)與功能研究.pdf

1、由于豬產(chǎn)仔數(shù)的遺傳力低，屬于限性表達(dá)，常規(guī)的育種技術(shù)對(duì)產(chǎn)仔數(shù)性狀的改變十分有限，所以尋找控制豬繁殖率的主效基因及其遺傳標(biāo)記對(duì)提高豬的產(chǎn)仔數(shù)具有重要意義。目前，關(guān)于繁殖率的研究很多，是畜牧業(yè)研究的熱點(diǎn)，但是國(guó)際上關(guān)于控制豬的產(chǎn)仔數(shù)的主效基因還沒(méi)有統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)，促卵泡激素(FSH-β)和雌激素受體(ER)兩基因是豬的產(chǎn)仔數(shù)的重要候選基因，貴州地方豬品種的低繁殖率問(wèn)題研究較少。 本論文應(yīng)用基因工程方法，克隆了糯谷豬、香豬的促卵泡激素(F

2、SH)β亞基基因，研究了基因的結(jié)構(gòu)，糯谷豬FSH-β基因長(zhǎng)1985bp，包括兩個(gè)外顯子和一個(gè)內(nèi)含子；從江香豬FSH-β基因全長(zhǎng)3704bp，含有3個(gè)外顯子和兩個(gè)內(nèi)含子；同時(shí)獲得榕江香豬同源染色體上兩種不同編碼區(qū)序列，全長(zhǎng)分別是3443bp和1985bp，分別包括三個(gè)外顯子和兩個(gè)內(nèi)含子、兩個(gè)外顯子和一個(gè)內(nèi)含子；這些豬品種均編碼129個(gè)氨基酸，包含18個(gè)氨基酸組成的信號(hào)肽和111個(gè)氨基酸組成的成熟肽，與其它豬種、人等哺乳動(dòng)物的相似性比較發(fā)現(xiàn)

3、：無(wú)論從堿基序列還是氨基酸序列來(lái)看，從江香豬與哺乳類動(dòng)物同源性最高，特別是與其它的豬種之間，而與兩棲類和魚(yú)類的同源性最低。對(duì)糯谷豬、香豬FSH-β基因中發(fā)生的堿基和氨基酸改變進(jìn)行分析的結(jié)果表明，替換的氨基酸處于蛋白的重要功能區(qū)，推測(cè)這些改變與蛋白的功能、豬種的低繁殖率有一定的關(guān)系。 在糯谷豬和香豬的FSH-β基因內(nèi)含子1中靠近第二外顯子發(fā)現(xiàn)了一段插入序列，經(jīng)分析屬于SINE序列。進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量對(duì)香豬、糯谷豬、柯樂(lè)豬、大白豬等F

4、SH-β基因中該SINE序列的多態(tài)性，共獲得三種基因型：AA型，AB型，BB型，并且發(fā)現(xiàn)在國(guó)內(nèi)豬種中B等位基因占優(yōu)勢(shì)，A等位基因在國(guó)外豬種中占優(yōu)勢(shì)，因此該插入片段可作為豬種選育時(shí)基因純合度的分子標(biāo)記。 為了研究SINE序列對(duì)于基因表達(dá)的影響，采用RT-PCR和Northern blotting兩種方法研究了雜合基因型(AB)個(gè)體中FSH-β基因的表達(dá)，結(jié)果證實(shí)只有B等位基因表達(dá)，提示該SINE序列的插入影響mRNA的轉(zhuǎn)錄，不利于

5、基因的表達(dá)，該結(jié)論以前無(wú)人報(bào)道。 雌激素受體(ER)是影響豬種繁殖率的另一個(gè)重要候選基因，因此本論文通過(guò)RT-PCR的方法，分別以貴州從江香豬的子宮、卵巢的cDNA為模板擴(kuò)增得到ER-a、ER-β cDNA，經(jīng)連接、轉(zhuǎn)化、鑒定、測(cè)序，得到兩種類型的ERcDNA全長(zhǎng)，分析插入片段發(fā)現(xiàn)：從江香豬ER-a cDNA的ORF框長(zhǎng)1788bp，編碼596個(gè)氨基酸，前20個(gè)氨基酸為信號(hào)肽序列，后576個(gè)氨基酸為成熟肽序列，ER-β的ORF框

6、長(zhǎng)1581bp，編碼526個(gè)氨基酸，前24個(gè)氨基酸為信號(hào)肽序列，后502個(gè)氨基酸為成熟肽序列，研究了基閃的結(jié)構(gòu)，與其它豬種、人等哺乳動(dòng)物的相似性關(guān)系，對(duì)香豬ER-a、ER-β兩基因中發(fā)生的堿基和氨基酸改變進(jìn)行分析的結(jié)果表明，替換的氨基酸處于蛋白的重要功能區(qū)，推測(cè)這些改變與蛋白的功能、豬種的低繁殖率有一定的關(guān)系。另外，本論文采用SSCP方法，分析了香豬、糯谷豬、柯樂(lè)豬、大白豬、大約克等豬種ER基因的多態(tài)性，結(jié)果表明B等位基因在國(guó)內(nèi)豬品中占