普瑞巴林對慢性顳葉癲癇大鼠海馬凋亡調(diào)控基因的影響.pdf

1、目的：
　　本課題采用氯化鋰-匹羅卡品化學誘導的方法建立慢性顳葉癲癇模型，研究新型抗癲癇藥普瑞巴林對顳葉癲癇大鼠海馬組織Bax和Bc1-2表達的影響，探討普瑞巴林治療癲癇的藥理學機制，及對顳葉癲癇大鼠海馬神經(jīng)元的抗凋亡作用。
　　方法：
　　30只雄性SD大鼠按照體質(zhì)量隨機分為正常對照組、慢性顳葉癲癇模型組和普瑞巴林治療組，每組10只。采用氯化鋰-匹羅卡品化學誘導的方法建立慢性顳葉癲癇模型，當大鼠癇性發(fā)作達到V級且持續(xù)

2、1小時后，腹腔給予硫酸阿托品和地西泮解除癇性發(fā)作。正常對照組以相同體積的生理鹽水取代氯化鋰和毛果蕓香堿。持續(xù)觀察3周后普瑞巴林治療組給予腹腔注射普瑞巴林40mg/kg/天，連續(xù)三周。正常對照組、顳葉癲癇模型組大鼠給予等量生理鹽水腹腔注射，療程相同。采用免疫組織化學染色、蛋白質(zhì)印跡法(Western blot)檢測各組大鼠海馬區(qū)Bax和Bc1-2的表達情況。
　　結果：
　　1.匹羅卡品致癇后，大鼠呈現(xiàn)典型的三期行為學變化：急

3、性期，潛伏期，慢性期。癲癇持續(xù)狀態(tài)大鼠成模率86.7％，死亡率26.9％。癲癇持續(xù)狀態(tài)60分鐘后，存活大鼠2周后均出現(xiàn)自發(fā)性反復性癲癇發(fā)作，表明慢性顳葉癲癇模型造模成功，成模率為73.1％。經(jīng)普瑞巴林治療后，大鼠癲癇發(fā)作級別呈逐漸緩解趨勢。
　　2.利用免疫組織化學染色分別對各組大鼠海馬區(qū)Bax和Bc1-2表達進行檢測。Bax和Bc1-2陽性細胞均為胞質(zhì)、核膜陽性，呈棕黃色。實驗結果顯示：1)正常對照組大鼠海馬區(qū)可見少量表達Bax

4、陽性細胞；與對照組相比顳葉癲癇模型組大鼠海馬可見大量Bax陽性細胞(P<0.05)；普瑞巴林治療組大鼠海馬Bax陽性細胞數(shù)明顯少于模型組，但仍高于正常對照組，組間差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。2)正常對照組大鼠海馬區(qū)可見少量Bc1-2陽性細胞；模型組大鼠海馬Bc1-2陽性細胞數(shù)增多；普瑞巴林治療組大鼠海馬Bc1-2陽性細胞數(shù)顯著增多且高于模型組，組間差異具有統(tǒng)計學意義(均P<0.05)。
　　3.利用免疫印跡技術對大鼠海馬組

5、織Bax和Bc1-2蛋白表達進行研究。結果顯示：1)正常對照組大鼠海馬組織僅見少量Bax表達；模型組大鼠海馬組織Bax表達較對照組明顯升高；經(jīng)普瑞巴林干預后，治療組大鼠海馬Bax表達水平明顯降低，與模型組比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，但仍高于正常對照組(P<0.05)。2)正常對照組大鼠海馬組織僅見Bc1-2少量表達；模型組大鼠海馬Bc1-2表達水平顯著升高；普瑞巴林治療組大鼠海馬Bc1-2表達水平明顯升高，與模型組比較差異有統(tǒng)

6、計學意義(P<0.05)。
　　結論：
　　1本課題采用的氯化鋰-匹羅卡品化學誘導的慢性顳葉癲癇大鼠模型造模較為成功，大鼠行為學改變符合人類慢性顳葉癲癇的發(fā)展規(guī)律，可應用于實驗研究。
　　2凋亡調(diào)控基因Bax和Bc1-2在顳葉癲癇慢性期表達上調(diào)，表明Bax參與了癲癇大鼠海馬神經(jīng)元的凋亡機制，促進了神經(jīng)元細胞凋亡。
　　3普瑞巴林有減輕癲癇發(fā)作次數(shù)、降低發(fā)作程度的作用，提示其可能有治療癲癇的作用。
　　4普瑞